Two types of phosphatidylinositol(PI) 3-kinase (PI3K) have been purified 6250-fold (PI3KI) and 1250-fold (PI3KII) from the cytosol fraction of bovine thymus, respectively. Purified PI3KI and PI3KII were found to be apparent molecular weight of 110 KDa and 190 KDa respectively by a gel filtration. On the other hand, on SDS gel electrophoresis molecular weight of PI3KI was also estimated as 110 KDa but PI3KII showed two bands of which molecular weight are 110 KDa and 85 KDa, suggesting a heterodimer form. Peptide mapping analysis also demonstrated that a 110 KDa protein contained in PI3KII is the same protein as PI3KI. Specific activity of PI3KI was calculated as 250 nmol/min/mg protein, while that of PI3KII was as 25 nmol/min/mg protein, indicating that monomer has higher activity than heterodimer. PI3KII but not PI3KI was co-immunoprecipitated with pp60^<v-src> and middle T/pp60^<c-src> even in the conditions where PI3Ks were not phosphorylated suggesting that non phosphorylated PI3K r
… Moreecognized pp60^<v-src> PI3KII was phosphorylated by pp60^<v-src> and bound to pp60^<v-src>. Anti-p85 (85 Kda subunit of PI3KII) antibody which precipitated PI3KII co-immunoprecipitated pp60^<v-src> in src-transformed cells suggesting that PI3KII bound to pp60^<v-src>. All these data shows that these PI3Ks are regulated independently.精製したPI3KIおよびPI3KIIは、ゲルろ過により分子量がそれぞれ、110kDaおよび190kDa、PI3KIIのSDS-PAGEでは110kDaおよび85kDaの2量体であることが判明した。また、S.aureusV8proteaseを用いたペプチドマッピングではPI3KIとPI3KIIの85kDa蛋白が同一パターンを示した。これはPI3KIが110kDaのモノマー、PI3KIIがPI3KIと85kDa蛋白の結合したヘテロダイマーであり、更に、PI3KIの比活性(250nmol/min/mg)はPI3KIIの比活性(50nmol/min/mg)に比べ5倍高いことを考え合わせると、活性基は110kDa蛋白に存在し、85kDa蛋白はこの110kDa蛋白に結合することによりPI-3kinase活性を調節(抑制)する調節蛋白であることが示唆される。次に精製したPI-3kinaseとpp60^<v-src>との結合を調べるため、src/3Y1、src/CEF、pp60^<v-src>(src/3Y1、src/CEF)との結合は、PI3KIではなくPI-3KIIを加えた時にのみ認められた。同様にpolyomamT/3Y1より免疫沈降で得たmT/pp60^<c-src>複合体にもPI-3KIIが結合した。外来性に加えたPI-3KIIはpp60^<c-src>ではなくpp60^<v-src>によりチロシン残基がリン酸化され、しかもこのチロシンリン酸化は85kサブユニットに認められた。またinvivoにおいてもpp60^<v-src>がPI-3kinaseと直接結合していることが判明した。 Less