Drebrins are developmentally-regulated actin-binding proteins. First, we used neuroblastoma cells as a model for neural differentiation. In undifferentiated cells, drebrin E was scattered as flocculus small dots along the stress fibers. In parallel with the neuronal differentiation by retinoic acid treatmant, drebrin E was accumulated, accompanying filamentous (F) actin, in the submembranous cortical cytoplasm. F-actin with drebrin E was more stable against cytochalasin D than F-actin without it. These results indicate that drebrin E play roles in neuronal differetiation by changing its subcellular localization with stabilized filamentous actin. Second, drebrin expression was induced in nonneuronal cells (L-cells) via transfection with two kinds of drebrin expression vectors containing beta-actin promoter (MiwD-6) and methallothionein-I promoter (MTI-5). In these transfected cells, drebrin expression changed stress fibers into mesh work structure of actin fibers. After treatment with c
… Moreolcemid and cytochalasin D,most of the L-cells shrinked and became round, however three-quarters of the MiwD-6 cells maintained thier processes. After treatment with cytochalasin D,MTI-5 cells with drebrin expression induced by CdSO_4 did'nt make retraction processes in spite of disruption of stress fibers, while most L-cells formed retraction processes. Immunocytochemical analysis using NBD-phallacidin and anti-vinculin antibody showed that cytochalasin D caused disruption of actin fibers in L-cells, MiwD-6 cells, and MTI-5 cells, but that it didn't cause disruption of adhesion plaques in MiwD-6 and MTI-5 cells, in contrast to disappearance of those in L-cells. Because cytochalasin D has no effects on vinculin polymerization, these results suggest that drebrin has effects on actin fibers and adhesion plaques, via an interaction with actin.まず、ヒト神経芽細胞腫由来SH-SY5Y細胞をレチノール酸(RA)によって分化させた。未分化SH-SY5Y細胞では、ドレブリンは細胞質内に斑点状に存在し、ストレスファイバー(SF)上においても連続性を持たずに点状にのみ存在した。分化して突起を伸展したSH-SY5Y細胞では、細胞体および突起の細胞膜近傍に局在が変化し、F-アクチンと共在したが、このF-アクチンはアクチンの脱重合剤サイトカラシンDに対して、SFを形成するF-アクチンよりも安定性が高かった。このことはドレブリンがアクチンの重合状態に影響を与えている可能性を示唆している。また、蛋白リン酸化酵素阻害剤k-252aによってもRAの場合と同様の変化がみられ、RAによるドレブリンの膜近傍への局在の変化には蛋白リン酸化酵素活性の阻害が関与すると推測された。次に非神経細胞であるL細胞にドレブリンA遺伝子を導入してドレブリンを発現させたところ、SFは太く束状になって蛇行する、あるいは網目状のアクチン線維に変化し、ドレブリンが共在した。ドレブリン発現細胞では、サイトカラシンDに対して接着斑が安定化しており、同時にビンキュリン発現量の増加が確認された。ドレブリンはアクチンの重合状態を変化させることによってアクチン線維の形態のみならず接着斑の状態にも影響を与えている可能性が示唆された。 Less