In order to elucidate early evolution of eukaryotes, we have been studying phylogenetic relationship among protists using multiple molecular sequence data. In this project, we established the methods to get much DNAS needed for gene analyses of the protists, including Giardia lamblia (diplomonads), Trichomonas vaginalis (parabasalids), Entamoeba histolytica (entamoebidae), Trypanosoma cruzi (euglenozoa), Blastocystis hominis (stramenopiles), Plasmodium falciparum, Toxoplasma gondii, and Cryptosporidium muris (alveolata), Glugea plecoglossi, Encephalitozoon hellem, and E. cuniculi (microsporidia), by collaborating with the researchers in various institutions. On the basis of the materials of these protists, we sequenced the genes encoding translation elongation factors, 1 alpha and 2, isoleucyl- and valyl-tRNA synthetases, 70kDa heat shock protein, and other several molecules. Phylogenetic analyses including these original data clearly suggested 1) that all of the four amitochondriate p
… Morerotists lineages, diplomonads, parabasalids, entamoebidae, and microsporidia had lost their mitochondria secondarily during their evolution, 2) that Blastocystis hominis is involved in stramenopiles and the closest relative of stramenopiles is alveolata and 3)that microsporidia are close to fungi.これまでの研究において、培養条件を確立し、核酸抽出に成功している原生生物種、すなわち、Giardia lamblia,Trichomonas vaginalis,Trichomonas tenax,Entamoeba histolytica,Trypanosomacruzi,Blastocystis hominis,Plasmodium falciparum,Toxoplasma gondii,Cryptosporidium murisについては、本年度も他施設の研究協力者の支援の下でこれらの維持を継続して行なった。ミトコンドリアをもたない寄生虫でアユに寄生するGlugea plecoglossi(Microsporidia)については、培養ができないため、大量のサンプルを採取して核酸抽出を行なった。また、培養が可能なMicrosporidia(Encephalitozoon cuniculiびEncephalitozoon hellem)については、培養条件を確立し、核酸抽出およびその大量調製を行なった。G.lamblia,T.vaginalis,E.histolytica,G.plecoglossi,E.hellem,E.cuniculi,P.falciparumのそれぞれの生物種について、ペプチド鎖伸長因子2(EF-2),インロイシン-tRNA合成酵素(IleRS),ヴァリン-tRNA合成酵素(ValRS)の遺伝子解析を行った。B.hominisについては、小亜粒子リボソームRNA(SSUrRNA),液胞型ATPase(v-ATPase),70kDa熱ショック蛋白質(hsp70)の遺伝子解析を行った。E.hellem,E.cuniculiについては上記の他にもさらに、ミトコンドリア型hsp70の遺伝子解析を行った。これらのオリジナルデータを含めてさまざまな分子種の分子系統樹を推定し、それらの結果を総合評価した結果、以下の可能性の高いことが明らかとなった。1. ミトコンドリアをもたない分類群のいづれもが、進化の過程でミトコンドリアを2次的に喪失したものである。2. Alveolata(繊毛虫やPlasmodium,Toxoplasmaなどを含む分類群)はStramenopiles(褐藻、珪藻やBlastocystisを含む分類群)の姉妹群を形成する。3. Microsporidiaは、従来示唆されていたように真核生物の初期に分岐した分類群ではなく、むしろ菌類もしくは動物・菌類の共通祖先の近くに位置づけられる。 Less