To investigate mechanisms of interferon (IFN) resistance, we have established an IFN-resistant cell line Daudi^<res> by long-term exposure of IFN-alpha to Daudi cells. Daudi^<res> cells were I x lO^4 times more resistant to IFN-alpha than parental cells. Expression of IEN receptors, STATI, STAT2, (2'-5') oligoadenylate synthetase, RNase L, and double-stranded RNA-dependent protein kinase was almost equally induced or enhanced by IFN-alpha in both cell lines. Among IFN-inducible genes examined, only ICE expression was deficient in Daudires cells. We then examined the regulatory mechanisms of the ICE promoter, and found that IFN-induced transcriptional activation of ICE was dependent on the binding of IRF-1 to its initiator (Inr) element. IRF-2 also bound to the same sequence and acted, in contrast, as a repressor. mr binding of IRF-1 and IRF-2 was diminished in IFN-treated Daudi^<res> cells due to insufficient induction of both proteins. Moreover, the IRF-l/IRF-2 ratio was significantly
… More lower in Daudires cells than in parental cells. As a result of this imbalance, ICE promoter activation was impaired in this cell line. Forced IRF-l expression was able to activate the ICE promoter in Daudi^<res> cells. Moreover, ICE mRNA induction was also defective in other lFN-resistant cell lines such as HL-60 and K562. Constitutive binding of IRF-2 and the lack of IRF-l binding were observed in the ICE promoter of both cell lines. These results suggest that IRFs and their target genes including ICE are implicated in IEN resistance of some cell types.(1)IFN反応性分子の発現と機能についての検討:Daudi-SとDaudi-Rの間で、IFNのシグナル伝達に関与する分子群(IFN受容体、STAT-1.STAT-2など)、IFN反応性分子(2'-5'AS、RNaseLなど)の発現に差はなく、耐性化の原因はIFNによって発現が修飾される核内遺伝子群にあると推定された。その一つとしてアポトーシス誘導因子であるICEの発現が、Daudi-Rにおいて特異的に欠損していることがわかった。そこでまずICE遺伝子の転写調節機序について検討し、ICE発現はinitiator elementへのIRF・1の結合により制御されることを明らかにした。Daudi-Rにおいては親株に比べ、IFNによるIRF-1の誘導性が低下していた(FEBS letters投稿中)。一方、久留米大学の吉村教授と共同研究を行い、Daudi-R細胞においては、STATの活性化を特異的に阻害する因子であるJABの発現が亢進していることを見い出した(Blood 92:1668-1676、1998)。このようにIFN耐性の機構には種々のタイプがあり、その解明にはさらなる研究が必要と思われる。(2)IFNによる転写因子E2Fの抑制とその機構:IFNが、種々の増殖関連遺伝子の発現を促進する転写因子であるE2Fの活性を抑制することを明らかにした(J.Biol.Chem.272:12406-12414,1997)。さらにその機序として、IFNがE2Fのサブユニットの一つであるE2F-1の転写を抑制することを見い出し、その際、IFNによってプロモーター上に転写抑制性複合体であるE2F-4/pRB、E2F-4/p130の形成が誘導されることがわかった(Oncogene誌4月号に掲載予定)。 Less