We have proposed a hypothesis for oviposition mechanism as follows ; ovarian prostaglandin is released into peripheral plasma to stimulating uterine contractions, which in turn, triggers AVT release from the neurohypophysis. The present project was conducted to prove the above hypothesis by providing following evidence on the molecular basis.1. Prostaglandins were produced in the theca layers of the largest pre- and postovulatory follicles and tissue PG level was highest with concurrent increase in plasma PGF concentration immediately before oviposition. Ovarian-oviposition inducing factor was identified as PG by HPLC analysis. These results indicate that ovarian PG plays a pivotal role in the regulation of oviposition.2. Plasma AVT concentration also increased at the time of oviposition. AVT was released in response to uterine contractions but this increase was suppressed by indomethacin treatment which delayed oviposition. Immunocytochemical studies revealed that AVT-containing neuro
… Morens were detected at the preoptic region and superficial area of the third ventricle. AVT cDNA was cloned and its base sequence was determined. Using the 562-base cDNA as a probe Northern hybridization analysis detected about 700 bases of AVT mRNA in the hypothalamus. The mRNA levels increased 4-fold after 4-day of water deprivation. Analysis of in situ hybridization revealed AVT mRNA localized in the periventricular nuclei of the hypothalamus.3. Finally, the project of cloning of AVT receptor cDNA is stil in progress but solubilized fraction of AVT receptor of the chicken uterus was purified, electophoresed and this fraction was isolated. At present, amino acid sequencing is under an investigation and will be used for primers in PCR cloning to isolate the gene. On the basis of amino acid sequences of homologous region of human oxytocin receptor cDNA and rat arginine vasoporessin receptor, primers were synthesized for RT-PCR of chicken uterus RNA. The 452-bases RT-PCR cDNA product was used as a probe for Northern hybridization of the chicken uterus. Hybridizable mRNA species of 5.6, 4.6 and 2.1 kd were identified as AVT receptor mRNA.AVTは視床下部のみならず、様々な末梢組織においても産生されることが明らかとなっているが、本研究では、排卵前の卵胞壁細胞においても産生していることが、免疫的研究とDNA組換え技術法によって明らかとなった。3.後葉ホルモンが子宮筋に対し、生理的に作用する第一のステップは、子宮筋特異的レセプターとの結合であり、標的器官レベルで放卵が調節される可能性がある。この意味において子宮筋AVTレセプター動的解析を行なったところAVTレセプターのKd値もBmax値も放卵時に著しく減少し、放卵後2時間には回復した。さらにAVTレセプターcDNAクローニング計画では、(1)子宮筋の可溶画分を抽出し、電気泳動解析を行ない、AVTレセプター画分を採取した。現在、アミノ酸シーケンシングする段階に来ている。(2)ヒト及びラット後葉ホルモンレセプターcDNA塩基配列をもとにオリゴヌクレオチドプライマーを合成し、産卵鶏子宮筋の全RNAをもとにPCR処理を行なった。452bpcDNA産物を得て、これをプローブとして産卵鶏子宮筋全RNA中に5.6、4.0及び2.1kbのAVTレセプターmRNA分子種を同定した。以上のように本研究の大要は、(1)卵巣プロスタグランジンの産生部位の特定と放卵調節への関与、(2)下垂体後葉ホルモンの中枢及び末梢組織における産生部位の特定(タンパク質レベル及び遺伝子分子生物学的解析)、発現機序と放出機序、(3)AVTレセプターの動的解析とcDNAクローニング及びアミノ酸シーケンシングによる構造解析を行ない、国の内外の研究者による共同研究として世界的にも極めて質の高い新しい事実発見を提供することができた。このプロジェクトによる外国研究者訪問と内国研究者との緊密性と協力性が将来の研究にも大きな弾みとなったことも見逃せない成果であり、文部省関係者に深謝申し上げたい。 Less