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Description

Translated from Japanese

【発明の詳細な説明】 【０００１】 【産業上の利用分野】本発明は、分析対象物を含む試料を希釈することなく、簡易に半定量を行なうことができる免疫化学的方法および装置に関する。 BACKGROUND OF THE INVENTION [0001] FIELD OF THE INVENTION The present invention, without diluting the sample containing the analyte, to an immunochemical method and apparatus capable of performing semiquantitative easily.【０００２】 【先行技術】血液、尿等の生体試料中に含まれる微量物質の定性または定量方法として、その感度の高さから免疫学的測定方法が汎用されている。 2. Description of the Prior Art Blood, qualitative or quantitative methods of trace substances contained in a biological sample such as urine, immunological measuring methods because of their high sensitivity is generally used.その手法の内、クロマトグラフィーを用いたいわゆるイムノクロマト法は、 Among the techniques, the so-called immunochromatography using chromatography,操作が簡単であり、検定に要する時間も短いため、現在多くの場面、例えば病院における臨床検査、研究室における検定試験等に広く使われている。 Operation is simple, because of the short time required for the test is also currently a number of occasions, for example, clinical tests in hospitals, has been widely used in the assay test or the like in the laboratory.【０００３】イムノクロマト法における目的物の検出方法としては、検出すべき物質（抗原）に種々の標識を付した特異的結合物質（抗体）をクロマト材上で反応させて検出すべき物質と標識特異的結合物質との複合体（抗原−抗体複合体）を形成させ、これを種々の手段により確認（検出）することが行なわれる。 [0003] Detection methods of the object in the immunochromatography method, to be detected by specific binding substances attached various label substance to be detected (antigen) (antibody) is reacted with the chromatographic material substance and the labeled specific binding complex of a substance (antigen - antibody complex) to form a, which can be confirmed (detected) by a variety of means are carried out.標識としては、放射性同位元素、発色団、蛍光団、酵素等があげられる。 As the labeling, radioactive isotopes, chromophores, fluorophores, enzymes, and the like.検出手段としては、放射線検出器、分光光度計等、または目視が挙げられる。 The detecting means, radiation detector, spectrophotometer, or the like is visually.【０００４】特開昭６４−３２１６９号公報には、クロマトグラフ的に可動で、視覚的に検出可能なシグナルを生じ得るコロイド粒子標識特異的結合物質（抗体）を利用したイムノクロマト法による定性分析法および装置が記載されている。 [0004] JP-A-64-32169, in chromatographically moving, qualitative analysis by visual immunochromatography utilizing colloidal particle labeled specific binding agent capable of producing a detectable signal (antibody) and apparatus are described.本公報には、目視による検出を可能とするための手段の一種が開示されている。 This publication, a kind of means for enabling detection by visual observation is disclosed.【０００５】本公報に記載の方法は、試料中の物質（抗原）の存在の有無または量を測定する方法であって、 [0005] The method described in this publication, a method of measuring the presence or amount of presence of a substance in a sample (antigen),(a) 分析すべき物質（抗原）を含む試料をクロマトグラフ媒体に接触させ、(b) 該クロマトグラフ媒体上で該コロイド粒子標識物質（標識抗体）を移動させることによって該コロイド粒子標識物質（標識抗体）の少なくとも一部を反応部位に移動させて結合反応させ、ついで(c) (A) to be analyzed substance samples containing (antigen) is contacted with the chromatographic medium, (b) the colloidal particles labeled substance by moving the colloidal particle label material (labeled antibody) on said chromatographic medium ( at least a portion of the labeled antibody) is moved to the reaction site is bound reaction, then (c)試料中の物質（抗原）の存在の有無および量を表示するため反応部位で該コロイド物質により生じた検出可能な応答を決定することからなる。 In reaction site to view the presence and amount of presence of a substance (antigen) in the sample consists of determining the detectable response produced by said colloidal material.【０００６】特表平１−５０３１７４号公報には、クロマトグラフ媒体上に湿潤状態において自由に移動し得る、検出すべき物質（抗原）に特異的に結合する標識された第１抗体（以下、標識第１抗体という）およびクロマトグラフ媒体上に固定された、検出すべき物質（抗原）に特異的に結合する標識されていない第２抗体（第２抗体は第１抗体とは異なる抗原結合部位を有する） [0006] Kohyo 1-503174 discloses, can move freely in the wet state on the chromatographic medium, the first antibody (hereinafter labeled specifically binding to the substance to be detected (antigen), fixed to the labeled first of 1 antibodies) and chromatographic medium on the second antibody (the second antibody that is not labeled specifically binding to the substance to be detected (antigen) antigen binding site that is different from the first antibody the have)（以下、無標識第２抗体という）が配置されており、検出すべき物質を含む液体試料をクロマトグラフ媒体の一端に添加し、クロマトグラフ媒体中を移動して標識第１ (Hereinafter, free of labeled second antibody) is disposed, adding the liquid sample containing the substance to be detected to one end of the chromatographic medium, the labeled first to move in the chromatographic medium抗体と反応した後に無標識第２抗体と反応し、クロマトグラフ媒体上の検出区域において検出すべき物質の存在の有無を確認できる装置が開示されている。 Reacted with unlabeled second antibody after reaction with the antibody can be confirmed the presence or absence of a substance to be detected in the detection zone on the chromatographic medium device is disclosed.本公報記載の装置に用いられている原理は、いわゆる（免疫学的） The principle used in the apparatus of the present publication is a so-called (immunological)サンドイッチ法と呼ばれるものである。 It is referred to as the sandwich method.従来、試料中の検出すべき物質の量を定量するには、検出すべき物質を含む試料を適宜希釈して一定感度を有する測定試薬による定性反応を行ない、陽性を示す最高希釈倍率に感度を乗じて半定量値を求める方法、または検体を希釈することなく測定感度の異なる試薬にて定性反応を行ない、陽性を示す試薬の感度をもって半定量値としていた。 Conventionally, to quantify the amount of detectable substance to be in the sample, subjected to qualitative reaction by measuring reagent having a constant sensitivity by diluting a sample containing a substance to be detected properly, the sensitivity to the highest dilution showing a positive the method multiplied by obtaining a semi-quantitative value or sample subjected to qualitative reaction with different reagents of the measurement sensitivity without diluting, with the sensitivity of the reagents shown positive was the semi-quantitative value.定量分析の手法としては、試験管やマイクロタイターウエルのような容器中で行なう液相アッセイ、クロマトグラフ媒体上で行なう固相アッセイなどがある。 As a method of quantitative analysis, a liquid phase assay carried out in a vessel such as test tubes and microtiter well, there is such as solid phase assays performed on chromatographic medium.上記２件の公報に記載の方法においても、定量は試料を希釈することによって行なっている。 Also in the method described in JP-2 above, quantification is performed by diluting the sample.【０００７】最近出願公開された特開平４−３５１９６ [0007] recently filed public was JP-A-4-35196２号公報には、試料を希釈せずに半定量を行なうことのできる特異結合分析方法および装置が開示されている。 The 2 discloses, specific binding assay methods and apparatus capable of performing a semi-quantitative undiluted sample is disclosed.本公報記載の方法は、クロマトグラフィーの手法を用い、試料中の分析対象物を定性または定量するに際し、 Upon the process of the present publication uses a technique of chromatography qualitatively or quantitatively an analyte in a sample,測定系に特定物質を存在させ、該特定物質の存在により、分析対象物の指標として測定される標識物質量を小さくすることにより、結果として分析対象物を含む試料を希釈したのと同様の結果（以下、希釈効果という）とするものである。 The measurement system in the presence of a particular substance, the the presence of a specific substance, by reducing the labeling substance weight measured as an indication of the analyte, resulting analyte same results as the samples were diluted comprising (hereinafter, referred to as dilution effects) it is an.【０００８】本公報記載の典型的な方法では、試料添加部に添加された分析対象物(a)は、所定量（濃度）でクロマト材上に固定化されることなく存在する特定物質 [0008] Typical in the method, the analyte added to the sample application part of the present publication (a) is a specific substance existing without being immobilized on chromatographic material by a predetermined amount (concentration)(b)および所定量でクロマト材上に固定化されることなく存在するの標識特異結合物質(e)と（特異結合物質存在部において）接触する。 (B) and present the labeled specific binding substance without being immobilized on chromatographic material in a predetermined amount and (e) (in specific binding substance present portion) contacts.一定量の分析対象物(a)は特定物質(b)と結合するが、分析対象物(a)が特定物質(b) A certain amount of analyte (a) binds a specific substance (b), the analyte (a) is a specific substance (b)より過剰に存在する場合には特定物質(b)と結合し得る部位が存在したままさらに特異結合物質（特定物質(b) More excessively while more specific binding substances site capable of binding to a specific substance (b) were present when present (a specific substance (b)または分析対象物(a)に対し特定物質(b)と同じ結合部位と結合し得る物質(g)）がクロマト材上に固定化されて存在する部位（検出部）へ移動する。 Or the analyte (a) to be attached to the same binding site as the specific substance (b) substance (g)) is moved to the site (detector) present is immobilized on a chromatographic material.検出部においては、特定物質(b)と結合し得る部位が存在しない、少なくとも特定物質(b)と結合した分析対象物(a)は、検出部を通過する。 In the detection unit, there is no site capable of binding to a specific substance (b), the analyte bound to at least a specific substance (b) (a) passes through the detector.少なくとも特定物質(b)と結合し得る部位を有する分析対象物(a)−標識特異結合物質(e)結合体 At least certain substances analyte having the moiety capable of binding to (b) (a) - labeled specific binding substance (e) conjugate(f)のみが検出部において固定化され、この固定化された結合体(f)を種々の検出手段により検出するものである。 (F) only is immobilized in the detection unit is for detecting the immobilized conjugate (f) by a variety of detection means.【０００９】 【発明が解決しようとする課題】従来、試料中の分析対象物を半定量するためには、一般に試料の希釈を必要としていた。 [0009] [Problems that the Invention is to Solve Conventionally, an analyte in a sample in order to semi-quantitative generally have required dilution of the sample.また、試料の希釈を必要としない測定感度の異なる試薬による方法は、各測定感度における反応の強さが異なるため判定が難しい等の欠点が有り、あまり一般に実用化されていない。 Moreover, the method according to different reagents of measurement sensitivity that does not require dilution of the sample, a disadvantage of such difficult determination is different for the intensity of the reaction at each measurement sensitivity there have been put to practical use in the less common.【００１０】試料の希釈操作は、医療、特に臨床検査等の現場において、試験実施者は被検試料たる血液、尿等からの試験実施者に対する病原菌の感染の可能性を増加させている。 [0010] dilution procedure of the sample medicine, particularly in the field of clinical tests, etc., trialists increases the likelihood of pathogen infection for trialists from a test sample serving as blood, urine and the like.また、大量の試料を半定量測定する場合に、希釈操作が必要なければ操作効率を格段に向上させられる。 Further, in the case of semi-quantitative measurement of large number of samples, it is caused to remarkably improve the operational efficiency unless required dilution procedure.そこで、本発明は、試料の希釈を必要としない免疫化学的簡易半定量方法および装置を提供することを目的とする。 The present invention aims at providing an immunochemical simple semi-quantitative method and apparatus that does not require dilution of the sample.【００１１】本発明と同様に試料の希釈を必要としない半定量方法として、上述した特開平４−３５１９６２号公報記載の発明があるが、本公報の方法では、検体の「希釈効果」の調整に関与する要因が多く、希釈効果の調整が困難であり、半定量値幅を狭く設定することができず、測定精度の点で難点があった。 [0011] As a semi-quantitative method which does not require dilution of the sample like the present invention, there is invention of Japanese Patent Laid-Open 4-351962 discloses the above description, in this publication the method, adjustment of the "dilution effect" of the specimen factors involved in many, it is difficult to adjust the dilution effect, it is impossible to set a semi-quantitative value width narrower, there is a drawback in the measurement accuracy points.本発明は、試料の「希釈効果」の調整に関与する要因が少ないため、希釈効果の調整が容易であり、感度良く、即ち半定量値幅を狭く設定することができる免疫化学的半定量方法および装置を提供することをも目的とする。 The present invention is, for factors involved in the adjustment of the "dilution effect" of the sample is small, it is easy to adjust the dilution effect, good sensitivity, i.e. immunochemical semi-quantitative methods can be set semi-quantitative value width narrower and the object of the invention is to provide a device.【００１２】 【課題を解決するための手段】本発明者は、上記目的を達成するため、鋭意研究を行ない、クロマト法による免疫化学的簡易アッセイにおいて、分析対象物の定性分析の前に、所定量で固定化されて存在する分析対象物に対する抗体により、固定化された抗体量に対応する試料中の分析対象物の一定量を捕捉し、その後の免疫化学的定性分析に付される分析対象物濃度を減少させることを特徴とする免疫化学的簡易半定量方法、および分析対象物を含む試料を添加するための試料添加部（Ａ）、試料中の分析対象物の一定量を捕捉する抗体が所定量で固定化されて存在する抗体固定部（Ｂ）、分析対象物の存在の有無を検出するための指標となる標識物質がクロマト移動しうる状態で存在する標識物質存在部（Ｃ）、標識物質を [0012] Means for Solving the Problems The present inventors, in order to achieve the above object, intensive performs research in immunochemical simple assay by chromatography, prior to qualitative analysis of an analyte, where the antibody to analyte present immobilized in quantitative, captures a certain amount of analyte in the sample corresponding to the immobilized antibody amount, the analyte to be subjected to subsequent immunochemical qualitative analysis sample addition part for adding a sample containing an immunochemical simple semi-quantitative methods, and analyte, characterized in that to reduce the object density (a), an antibody to capture a certain amount of analyte in the sample antibody fixing portion but present immobilized in a predetermined amount (B), the labeling substance present portion existing in a state where a labeling substance as an index for detecting the presence or absence of analyte can chromatographic movement (C) , a labeling substance検出するための検出用物質が固定化されて存在する検出部（Ｄ）および添加された試料とともに分析対象物の有無の検出に関与しない標識物質を吸収除去する吸収部（Ｅ）からなるイムノクロマト法による免疫化学的簡易半定量装置により、上記目的を達成し得ることを見出し本発明を完成した。 Immunochromatography detection substance for detection is from the absorption unit the labeling substance absorbs removed which is not involved in detection of the presence or absence of the detection portion (D) and the added analyte with a sample present immobilized (E) the by immunochemical simple semi-quantitative device, thus completing the present invention that it is possible to achieve the above object.【００１３】本発明の半定量方法および装置においては、一連のクロマト分析において、定性分析の前に分析対象物捕捉用の固定化された抗体で試料中の分析対象物の一定量を捕捉し、定性分析に付される試料中の分析対象物量（濃度）を予め減少させることにより、分析対象物を含む試料を希釈してからイムノクロマト法による定性分析に付したのと同様の効果（希釈効果）が得られるものである。 [0013] In a semi-quantitative method and apparatus of the present invention, in a series of chromatographic analysis, it captures a certain amount of analyte in the sample with an antibody which is immobilized the analyte for the capture prior to qualitative analysis, by reducing the analyte amount in a sample to be subjected to qualitative analysis (concentration) in advance, the same effect as the sample containing the analyte is diluted were subjected to qualitative analysis by the immunochromatography (dilution effect) it is those that can be obtained.【００１４】即ち、捕捉用抗体の固定量を段階的に変化させた（それぞれのユニットにおける試料の希釈の度合いが異なる）数個のユニットに同一の試料を添加してアッセイを行なえば、引続く各ユニットでの共通の感度を有する定性分析において、その分析結果が陽性から陰性または陰性から陽性に変化するユニットに設定された捕捉用抗体の固定量からその試料中の分析対象物の半定量値を決定することができる。 [0014] That is, by performing the assay capture a fixed amount of antibody was varied stepwise (the degree of dilution of the sample in the respective units are different) into several units by adding the same sample, followed by arguments in common qualitative analysis having sensitivity in each unit, a semi-quantitative value of the analysis result is the analyte in the sample from the fixed amount of the capture antibody that is set to a unit that varies positively from negative or negative from positive it can be determined.【００１５】以下、本発明を詳細に説明する。 [0015] In the following, the present invention will be described in detail.本発明において分析対象物となり得るものとしては、大きく分けて完全抗原とハプテン（不完全抗原）とがある。 As can be the analyte in the present invention, there is a complete antigen and a hapten (incomplete antigen) roughly.ここに完全抗原とは、それ自体で抗体産生を誘起する能力（免疫原性）を有する抗原物質をいい、主として分子量の大きいペプチドホルモン類等がこれに含まれる。 The hereby fully antigen, it refers to an antigenic substance having an ability (immunogenicity) to induce antibody production in itself, a large peptide hormones such as molecular weight mainly contained therein.ハプテン（不完全抗原）とは、抗体と結合できるが、それ自身では抗体産生を誘起する能力を有しないものをいい、比較的分子量の小さい（分子量１０００以下程度）ペプチド類等がこれに含まれる。 The hapten (incomplete antigen), can be attached to the antibody, refers to one that does not have the ability to induce antibody production by itself, relatively small molecular weight (molecular weight of 1000 or less extent) peptide, etc. are included in this .なお、ハプテンは、適当な担体、例えばウシ血清アルブミン等の蛋白に結合させると、抗体産生能を獲得する。 Incidentally, hapten, a suitable carrier, for example, be coupled to a protein such as bovine serum albumin, acquiring antibody production.◎以下にこれらの具体例を示すが、ここに記載されたものに限定されるわけではない。 ◎ Specific examples thereof are described below, not not be limited to those described herein.【００１６】 完全抗原の例： (1) ペプチドホルモンの例1) 成長ホルモン（ＧＨ）、副腎皮質刺激ホルモン（Ａ The complete antigen eg (1) Examples of peptide hormones 1) growth hormone (GH), adrenocorticotropic hormone (AＣＴＨ）、メラミン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ）、プロラクチン、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、オキシトシン等の下垂体ホルモン2) カルシトニン、副甲状腺ホルモン等のカルシウム代謝調節ホルモン3) インシュリン、プロインシュリン、膵ホルモン4) ガストリン、セクレチン等の消化管ホルモン5) アンギオテンシン、ブラジキニン等の血管に作用するホルモン6) ヒト胎盤性性腺刺激ホルモン（ｈＣＧ）、ヒト胎盤催乳ホルモン（ｈＰＬ）等の胎盤ホルモン(2) その他の物質の例1) 前立腺性酸性フォスファターゼ（ＰＡＰ）、アルカリ性フォスファターゼ、トランスアミナーゼ、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、トランスアミナーゼ、トリプシン、 CTH), melamine stimulating hormone (MSH), prolactin, thyroid stimulating hormone (TSH), luteinizing hormone (LH), follicle stimulating hormone (FSH), pituitary hormones 2 oxytocin, etc.) calcitonin, calcium, etc. parathyroid hormone the metabotropic hormone 3) insulin, proinsulin, pancreatic hormone 4) gastrin, gastrointestinal hormones 5 secretin, etc.) angiotensin, hormones 6 vasoactive bradykinin, etc.) human chorionic gonadotropin (hCG), human placental lactogenic hormone (hPL) placental hormones (2) examples of other substances 1) prostatic acid phosphatase such as (PAP), alkaline phosphatase, transaminase, lactate dehydrogenase (LDH), transaminase, trypsin,ペプシノーゲン等の酵素2) α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ガン胎児性抗原（ＣＥＡ）等のガン特異物質3) 免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）、フィブリン−フィブリノーゲン分解産物（ＦＤＰ）、抗トロンビンIII（Ａ Enzyme 2) alpha-fetoprotein such as pepsinogen (AFP), cancer specific substances 3, such as carcinoembryonic antigen (CEA)) immunoglobulin G (IgG), fibrin - fibrinogen degradation products (FDP), antithrombin III (AＴIII）、トランスフェリン等の血清蛋白成分4) リュウマチ因子、セロトニン、ウロキナーゼ、フェリチン、サブスタンスＰ等の物質その他生体成分およびそれらの代謝産物等の多くの物質が挙げられる。 TIII), serum protein component 4) rheumatoid factors such as transferrin, serotonin, urokinase, ferritin, many substances, such as substances other biological components and their metabolites, such as substance P and the like.【００１７】 ハプテン（不完全抗原）の例： (1) ステロイド系ハプテン1) エストロン、エストラジオール、エストリオール、 [0017] Examples of the hapten (incomplete antigen): (1) steroidal hapten 1) estrone, estradiol, estriol,エステトロール、エクイリン、エクイレニン等の卵胞ホルモン2) プロゲステロン、プレグナンジオール、プレグナントリオール、１９−ノル−エチステロンおよび酢酸クロルマジノン等の天然または合成黄体ホルモン3) テストステロン、デヒドロエピアンドロステロン、 Este trawl, equilin, estrogen 2) progesterone such Ekuirenin, pregnanediol, Puregunantorioru, 19-nor - ethisterone and natural or synthetic progestins 3 such as chlormadinone acetate) Testosterone, dehydroepiandrosterone,ジヒドロテストステロン、アンドロステン、エチオコラノロン等の男性ホルモン4) コルチゾール、コルチゾン、デオキシコルチコステロン、アルドステロン、テトラヒドロコルチゾール等の副腎皮質ホルモン5) ビタミンＤ類、コレステロール、コール酸、デオキシコール酸、ケノコール酸等の胆汁酸、強心性ステロイド、サポニン、サポゲニン等のその他のステロイド類(2) 生理活性アミン類1) エピネフリン、ノルエピネフリン、ドーパミン、エフェドリン等のカテコールアミンおよびそれらの代謝産物2) モルヒネ、コデイン、ヘロイン、塩酸モルヒネ、コカイン、メスカリン、パパベリン、ナルコチン、ヨヒンビン、レセルピン、エルゴタミン、ストリキニーネ等の生理活性アルカロイド類3) ＬＳＤ、アンフェタミン、メタンフェタミン、メ Dihydrotestosterone, androstene, androgen 4 such Echiokoranoron) cortisol, cortisone, deoxycorticosterone, aldosterone, corticosteroids 5) vitamin D such as tetrahydrocortisol, cholesterol, cholic acid, deoxycholic acid, such Kenokoru acid bile acids, cardiotonic steroids, saponins, other steroids such as sapogenins (2) physiologically active amines 1) epinephrine, norepinephrine, dopamine, catecholamines and their metabolites 2) morphine ephedrine, codeine, heroin, morphine hydrochloride , cocaine, mescaline, papaverine, narcotine, yohimbine, reserpine, ergotamine, bioactive alkaloids 3 strychnine, etc.) LSD, amphetamine, methamphetamine, mainプロバメート等のアミノ基含有向精神薬類(3) その他の例1) ＴＲＨ、ＬＨ−ＲＨ等の抗原性を有しない低分子ペプチド類2) ジヨードサイロニン、トリヨードサイロニン、サイロキシン等の甲状腺ホルモン類3) プロスタグランジンＥ 2 、プロスタグランジンＥ 3 、 Amino group-containing psychotropics such as Purobameto (3) Other examples 1) TRH, low molecular peptides 2 having no antigenicity such as LH-RH) diiodo thyronine, triiodothyronine, thyroid thyroxine such hormones 3) prostaglandin E 2, prostaglandin E 3,プロスタグランジンＦ 1 α等のプロスタグランジン類4) ビタミンＡ、ビタミンＢ類（ビタミンＢ 1 、Ｂ 2 、 Prostaglandins such as prostaglandin F 1 α 4) vitamin A, B vitamins (vitamin B 1, B 2,Ｂ 6 、Ｂ 12等）、ビタミンＥ、ビタミンＫ等のビタミン類5) ペニシリン、アクチノマイシン、クロロマイセチン、テトラサイクリン等の抗生物質類6) その他生体内に存在する成分、生体内に投与された薬物およびその代謝産物等。 B 6, B 12, etc.), vitamin E, vitamins 5 as vitamin K) penicillin, actinomycin, chloromycetin, components present in antibiotics 6) Other in vivo, such as tetracycline, drug was administered in vivo and such as its metabolites.【００１８】本発明で試料（検体）となり得るものとしては、上記分析対象物を含有するものであれば何でもよいが、尿、血清、血漿、血液、唾液、羊水等の生体試料が主に挙げられる。 [0018] as that can be the sample (analyte) in the present invention include, but may be any one that contains the analyte, urine, serum, plasma, blood, saliva, biological sample include mainly such amniotic fluid It is.【００１９】分析対象物の有無の指標となる標識は、直接標識または間接標識のいずれであってもよい。 The label is indicative of the presence or absence of the analyte may be either direct labeling or indirect labeling.直接標識は、検定結果を目視によって観察でき、追加の処理または工程を必要としない点で好ましい。 Direct labeling can be observed by eye assay results, preferable in that it does not require additional processing or process.間接標識の場合には、アッセイ終了後に標識を視覚化するための処理、 In the case of indirect labeling, processing for visualizing the labeled after completion of the assay,工程または装置が必要である。 Process or apparatus is needed.【００２０】直接標識に用いることができる標識物としては、金属ゾル、着色ラテックス粒子、色指示薬、リボゾームに含有されている着色物質、各種染料、各種顔料等の色素類、炭素ゾルのような非金属ゾル、ルミノール誘導体、アクリジニウムエステル等の化学発光物質、フルオレセイン、ローダミン等の蛍光物質等が挙げられるがこれらに限定されるものではない。 Examples of the labeling substance which can be used directly for labeling, metal sol, colored latex particles, the color indicator, the coloring material contained in the ribosome, various dyes, dyes of various pigments, non-like carbon sol metal sols, luminol derivatives, chemiluminescent substance such as acridinium esters, fluorescein, do not Although fluorescent material or the like rhodamine, and the like is not limited thereto.【００２１】間接標識に用いることができる標識物としては、ペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、ウレアーゼ、グルコースオキシダーゼ等の各種酵素等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。 Examples of the labeling substance which can be used for indirect labeling include peroxidase, beta-galactosidase, alkaline phosphatase, urease, various enzymes such as glucose oxidase and the like, but is not limited thereto.【００２２】直接標識による場合には、肉眼での色調観察、色濃度、発光強度、蛍光強度等の測定により、間接標識の場合には、使用した酵素によりその酵素の基質あるいはクロモーゲンの変化によって得られる色濃度、発光強度等を測定することにより検出を行なう。 [0022] When the direct label may give color tone observed with the naked eye, the color density, light emitting intensity, the measurement of such fluorescence intensity, in the case of indirect labeling, the change of the substrate or chromogen for the enzyme by the enzyme using color density to be carried out to detect by measuring the emission intensity or the like.【００２３】以下に本発明の半定量方法及び半定量装置を順次説明する。 [0023] sequentially illustrating a semi-quantitative method and semi-quantitative device of the present invention will be described below.本発明の半定量方法は、試料中の分析対象物を定量するに際し、試料中の分析対象物の一定量を、所定量で固定化されて存在する捕捉用抗体により、 Semi-quantitative method of the present invention, when quantifying an analyte in a sample, a certain amount of analyte in the sample, the capture antibodies present immobilized in a predetermined amount,捕捉用抗体の固定量（濃度）に応じて捕捉し、引続いて行なわれる免疫化学的定性分析に付される（関与する） A fixed amount of capture antibody to capture in response to the (concentration), and (involved) subjected to immunochemical qualitative analysis performed by subsequently分析対象物濃度を減少させることにより、結果的に分析対象物濃度を予め希釈して用いたのと同じ効果（希釈効果）が得られ、試料を希釈することなく精度よく半定量をおこなうことができることを特徴とするものである。 By reducing the analyte concentration, resulting in analyte concentration previously diluted to the same effect as using (dilution effect) is obtained, it is accurately performed semiquantitative without diluting the sample it is characterized in that it.【００２４】ここで、本発明の半定量方法を分析対象物が完全抗原である場合とハプテンである場合とに分けてさらに詳細に説明する。 [0024] Here, the analyte semi-quantitative method of the present invention is further described in detail by dividing into the case is the case with hapten is complete antigen.【００２５】Ｉ． [0025] I.分析対象物が完全抗原の場合図１〜３に基づいて説明する。 Analyte is described based on the case Figure 1-3 complete antigen.図１〜３は、アッセイを経時的に表したものである。 1-3 is that over time represents the assay.【００２６】試料中の分析対象物が完全抗原の場合には、免疫学的サンドイッチ反応を原理とし、構成する反応系において、検出用物質が抗体（以下、検出用抗体II [0026] When the analyte is completely antigen in a sample, the immunological sandwich reaction on the principle, in a reaction system constituting, detection substance is an antibody (hereinafter, detection antibody IIIまたは単に抗体IIIという）であり、標識物質も標識された抗体（以下、標識抗体IIまたは単に抗体IIという） I or simply as antibody III), labeling substances labeled antibody (hereinafter, referred to as the labeled antibody II or simply antibody II)である。 It is.これらの抗体II及び抗体IIIは、互に同一抗原（分析対象物）上の異なる抗原決定基を認識する抗体でなければならない。 These antibodies II and antibody III must be an antibody that recognizes the mutually same antigen (analyte) different antigenic determinants on the.【００２７】分析対象物を捕捉する捕捉用抗体（以下、 [0027] The capture antibody to capture the analyte (below,捕捉用抗体Ｉまたは単に抗体Ｉという）は、抗体IIまたは抗体IIIと同じ抗原決定基を認識するか、または抗体I That capture antibody I or simply antibody I), either recognize the same antigenic determinant as an antibody II or antibody III, or antibody IIおよび抗体IIIとは異なる抗原決定基を認識する抗体であればよい。 It may be an antibody that recognizes a different antigenic determinants I and antibody III.【００２８】ある濃度の分析対象物を含む試料を試料添加部（Ａ）に添加し（図１）、クロマト移動により抗体固定部（Ｂ）まで移動させ、ここに固定化されて存在する捕捉用抗体Ｉと反応させて、抗体Ｉの固定化抗体量に応じて分析対象物の一定量を捕捉した後、捕捉されなかった分析対象物は、標識物質存在部（Ｃ）にクロマト移動しうる状態で存在する標識抗体IIと反応して分析対象物−標識抗体II複合体を形成して（図２）、検出用抗体 [0028] There a sample containing analyte concentrations were added to the sample addition part (A) (Fig. 1), is moved to the antibody fixing portion (B) by chromatography movement, capture present immobilized here state reacted with antibody I, after capturing a certain amount of analyte in accordance with the immobilized antibody of the antibody I, the analyte which has not been captured, which can chromatographic moved on the labeling substance present section (C) present the labeled antibody II of reacting with the analyte in - to form a labeled antibody II complex (Fig. 2), detection antibodyIIIが固定化されて存在する検出部（Ｄ）までクロマト移動し、抗体IIIと反応して抗体III−分析対象物−標識抗体IIのサンドイッチ複合体を形成して検出部に不溶化されて留まる。 III is chromatography moves to the detection portion present immobilized (D), by reacting with the antibody III antibody III- analyte - to form a sandwich complex of labeled antibody II stays are insolubilized in the detection portion.分析対象物と結合していない標識抗体II Not bound to the analyte labeled antibody IIおよび過剰の分析対象物等は、検出部（Ｄ）を通過し吸収部（Ｅ）まで移動して反応系外へ除去される（図３）。 And excess analyte and the like are removed by moving past the detector (D) to the absorber (E) from the reaction system (Fig. 3).【００２９】検出部（Ｄ）に不溶化されて留まった抗体 [0029] Antibodies remained is insolubilized in the detection portion (D)III−分析対象物−標識抗体IIのサンドイッチ複合体の標識を指標として分析対象物の有無を確認する。 III- analyte - confirming the presence or absence of analyte the labeled sandwich complex of labeled antibody II as an index.【００３０】この方法では、検出部（Ｄ）の検出用抗体 [0030] In this way, the detection antibody of the detection section (D)IIIの量と標識抗体IIの量により、分析対象物の最少検出濃度（検出感度）が決定される。 The amount and the amount of labeled antibody II of III, minimum detection concentration of an analyte (detection sensitivity) are determined.試料中の分析対象物濃度が検出感度より高い場合、抗体固定部（Ｂ）の抗体Ｉの固定量に応じて一定量の分析対象物が捕捉されることにより、試料が希釈され、これによって分析対象物濃度を検出感度まで減少させるのと同様の効果（希釈効果）が得られ、抗体固定部（Ｂ）の抗体Ｉの量を調整することによって適切な濃度幅で半定量を行なうことができる。 If the analyte concentration in the sample is higher than the detection sensitivity, by a certain amount analyte in accordance with a fixed amount of antibody I antibody fixing portion (B) is captured, the sample is diluted, thereby analysis the same effect (dilution effect) can be obtained and reducing the target concentration to the detection sensitivity can be carried out semi-quantitative at an appropriate concentration range by adjusting the amount of antibody I antibody fixing portion (B) .【００３１】ここで、抗体ＩおよびIIIは、ポリクロナール抗体であってもよいし、モノクロナール抗体であってもよいが、測定感度等の点から特異性の高いモノクロナール抗体の方が好ましく、抗体IIは、抗原と反応して凝集が生じるとクロマト移動に支障を生じるため、抗体Ｉおよび抗体IIIと同一抗原上の異なる抗原決定基を認識するモノクロナール抗体でなければならない。 [0031] Here, the antibodies I and III may be a polyclonal antibody, may be a monoclonal antibody, but preferably toward the highly specific monoclonal antibody from the viewpoint of the measurement sensitivity, antibody II is to produce a trouble in chromatographic move the aggregate reacts with the antigen occurs, must recognize monoclonal antibodies with different antigenic determinants on the same antigen and antibody I and antibody III.ポリクロナール抗体およびモノクロナール抗体は、公知の方法により作製することができる。 Polyclonal and monoclonal antibodies can be produced by known methods.ポリクロナール抗体であれば、常法に従い、抗原（分析対象物）を動物に免疫して得た抗血清中から目的とする抗体を分離する。 If polyclonal antibodies, according to a conventional method to isolate a desired antibody antigen (analyte) from antiserum obtained by immunizing animals.モノクロナール抗体であれば、例えば、ケーラーとミルスタインの一般的方法（Nature 256 (1975) 495-497）に従い、抗原（分析対象物）で免疫したマウスの脾臓細胞と骨髄腫細胞を融合させ、目的の抗体を産生する融合細胞を選択し、この融合細胞から産生されるモノクロナール抗体を得る。 If monoclonal antibodies, for example, in accordance with the general method of Kohler and Milstein (Nature 256 (1975) 495-497), by fusing spleen cells with myeloma cells from mice immunized with antigen (analyte), select the fused cells that produce the desired antibody, obtaining the monoclonal antibody produced from the fused cells.【００３２】II． [0032] II.分析対象物がハプテンの場合測定原理により、それぞれ図４〜６および図７〜９に基づいて説明する。 Optionally measuring principle analyte haptens will be described with reference in FIGS. 4-6 and 7-9.分析対象物がハプテンの場合は、検出部（Ｄ）に固定化されて存在する検出用物質に対する競合反応を原理とする。 If the analyte is a hapten, the principle of competitive reaction for detecting substances present immobilized in the detection section (D).【００３３】(1) 図４〜６の場合は、検出部（Ｄ）に検出用物質としてハプテン抗体（以下、検出用抗体Ｖまたは単に抗体Ｖという）を固定化し、標識物質存在部（Ｃ）に標識物質として標識されたハプテン−キャリア蛋白結合物またはハプテン若しくはその化学的変性物を化学的に結合せしめたカルボキシル基含有水溶性モノオレフィン系高分子化合物（以下、標識−ハプテン−キャリア結合物という）をクロマト移動しうる状態で保持させ、抗体固定部（Ｂ）にはハプテン抗体（以下、捕捉用抗体IVまたは単に抗体IVという）を分析対象物捕捉用抗体として固定する。 [0033] (1) In the case of Figure 4-6, the detection section (D) to a hapten antibody (hereinafter, referred to as detection antibody V or simply antibody V) as detection substance is immobilized, labeled substance presence portion (C) a labeled hapten as labeling substance - carrier protein conjugate or hapten or its chemically modified product chemically bonded allowed carboxyl group-containing water-soluble monoolefinic polymer compound (hereinafter, labeled - hapten - carrier conjugate of ) is held in a state capable of chromatographic move, the antibody fixing portion (B) a hapten antibody (hereinafter, for fixing a capture antibody IV or simply analyte capture antibody) that antibody IV.【００３４】ハプテン抗体IVおよびＶは分析対象物ハプテンに対する結合能を有すれば同一の抗体である必要はなく、分析対象物ハプテンに対する交叉反応により分析対象物と結合するものであってもよい。 The hapten antibody IV and V are not required to be the same antibody if it has a binding capacity for the analyte hapten, it may be one that binds the analyte by cross reaction to the analyte hapten.【００３５】標識物質の構成成分であるハプテンは、分析対象物であるハプテンそのものであってもよいし、抗体Ｖに対し分析対象物ハプテンとの交叉反応により結合できるハプテンであってもよい。 The hapten which is a component of the labeled substance may be a hapten itself is analyte may be a hapten that can be bound by cross-reaction with the analyte hapten to antibody V.【００３６】ある濃度の分析対象物を含む試料を試料添加部（Ａ）に添加し（図４）、クロマト移動により抗体固定部（Ｂ）に移動させ、捕捉用抗体IVと反応させ、捕捉用抗体IVの固定量に応じて分析対象物の一定量を捕捉した後（図５）、捕捉されなかった分析対象物および標識物質存在部（Ｃ）にクロマト移動しうる状態で存在する標識−ハプテン−キャリア結合物は、クロマト移動により検出部（Ｄ）へ移動し、検出部（Ｄ）に固定化されて存在する検出用抗体Ｖと競合的に結合する。 [0036] There a sample containing analyte concentrations were added to the sample addition part (A) (Fig. 4), is moved to the antibody fixing portion by chromatography movement (B), is reacted with capture antibody IV, seizure labeled exist after trapping a certain amount (FIG. 5), can chromatographic moved to an analyte which has not been captured and labeled substance presence portion (C) the state of a fixed amount the analyte depending on the antibody IV - hapten - carrier conjugates, and movement detection unit by chromatography moved to (D), competitively bound to a detection antibody V present immobilized in the detection section (D).検出部（Ｄ）に結合されないものは、吸収部（Ｅ）までクロマト移動して反応系外へ除去される（図６）。 Shall not be bound to the detection section (D) is removed by chromatography moved to absorber (E) from the reaction system (Fig. 6).【００３７】この方法では、検出部（Ｄ）の検出用抗体Ｖの量と標識物質（標識−ハプテン−キャリア結合物） [0037] In this method, the amount of detection antibody V of the detection section (D) and the labeling substance (labeled - hapten - carrier conjugate)量により、両者間の結合反応を競合阻止し得る最少の分析対象物ハプテンの濃度（検出感度）が決定される。 The amount, the concentration of the analyte hapten minimal that the coupling reaction can compete prevented therebetween (detection sensitivity) are determined.【００３８】試料中の分析対象物ハプテン濃度が検出感度より高い場合、抗体固定部（Ｂ）の捕捉用抗体IVの固定量に応じて一定量の分析対象物ハプテンを捕捉することにより、試料中の分析対象物ハプテン濃度を検出感度まで減少させ、試料を希釈して用いたのと同じ効果（希釈効果）が得られ、捕捉用抗体IVの固定量を調整することにより適切な濃度幅で半定量を行なうことができる。 [0038] If the analyte hapten concentration in the sample is higher than the detection sensitivity, by capturing a certain amount of the analyte hapten in accordance with the fixed amount of capture antibody IV antibody fixing portion (B), in a sample reduce the analyte hapten concentrations up detection sensitivity, the same effect as was used to dilute the sample (dilution effect) is obtained, the half at the appropriate concentration range by adjusting the fixed amount of capture antibody IV it is possible to perform a quantitative.【００３９】(2) 図７〜９の場合は、検出部（Ｄ）に検出用物質としてハプテン−キャリア蛋白結合物またはハプテン若しくはその化学的変性物を化学的に結合せしめたカルボキシル基含有水溶性モノオレフィン系高分子化合物（以下、検出用ハプテン−キャリア結合物という） [0039] (2) case of FIG. 7-9, haptens as detection substance to the detection unit (D) - carrier protein conjugate or hapten or chemically bonded allowed carboxyl group-containing water-soluble and their chemical modification products monoolefinic polymer compound (hereinafter, the detection hapten - that carrier conjugate)を固定化し、標識物質存在部（Ｃ）に標識物質として標識ハプテン抗体（以下、標識抗体VIIまたは単に抗体VII The immobilized, labeled hapten antibody (hereinafter labeled substance presence portion (C) as a labeling substance, the labeled antibody VII or simply antibody VIIという）をクロマト移動しうる状態で保持させ、抗体固定部（Ｂ）には、分析対象物ハプテンの捕捉用抗体（以下、捕捉用抗体VIまたは単に抗体VIという）が固定されている。 The) that is held in a state capable of chromatographic movement, the antibody fixing portion (B), capture antibody analyte hapten (hereinafter, referred to as capture antibody VI or simply antibody VI) is fixed.【００４０】抗体固定部（Ｂ）の捕捉用抗体VIと標識物質存在部（Ｃ）の標識抗体VIIは分析対象物のハプテンに対する結合能を有するものであれば同一の抗体である必要はなく、交叉反応により分析対象物ハプテンと結合する抗体であってもよい。 The labeled antibody VII antibody fixing portion capture antibody VI and the labeling substance present portion of (B) (C) need not be the same antibody as long as it has an ability to bind to the hapten analyte, an antibody that binds to the analyte hapten by cross reaction may be.【００４１】また、検出部（Ｄ）に不溶化されている検出用ハプテン−キャリア結合物の構成成分であるハプテンは、分析対象物であるハプテンそのものであってもよいし、分析対象物ハプテンとの交叉反応により標識抗体 Further, the detection hapten is immobilized in the detection section (D) - hapten which is a component of carrier conjugate may be a hapten itself is the analyte, the analyte hapten labeled antibodies by cross-reactionVIIと結合できるハプテンであってもよい。 VII and it may be a hapten that can bind.【００４２】ある濃度の分析対象物ハプテンを含有する試料を試料添加部（Ａ）に添加し（図７）、クロマト移動により抗体固定部（Ｂ）へ移動させ、捕捉用抗体VIと反応させ、捕捉用抗体の固定量に応じた量の分析対象物ハプテンを捕捉する。 [0042] There a sample containing an analyte hapten concentrations were added to the sample addition part (A) (Fig. 7), moves the antibody fixing portion to (B) by chromatography movement, is reacted with capture antibody VI, capturing an amount analyte hapten corresponding to a fixed amount of capture antibody.ここで捕捉されなかった分析対象物ハプテンは、標識物質存在部（Ｃ）へ移動し、クロマト移動しうる状態で保持されている標識抗体VIIと反応して分析対象物ハプテン−標識抗体VII複合体を形成する（図８）。 Analyte hapten which has not been captured here, move labeled substance presence portion to (C), labeled antibody VII and reacting with the analyte hapten, which is held in a state capable of chromatographic movement - labeled antibody VII complex to form (Fig. 8).この複合体および未反応の標識抗体VIIは検出部（Ｄ）へ移動し、ここに固定化されている検出用ハプテン−キャリア結合物と未反応の標識抗体VIIが結合する。 The labeled antibody VII complex and unreacted moves detector to (D), wherein the detection hapten is immobilized - labeled antibody VII carrier conjugate and unreacted binding.検出部（Ｄ）に結合されないものは、吸収部（Ｅ）までクロマト移動して反応系外へ除去される（図９）。 Shall not be bound to the detection section (D) is removed by chromatography moved to absorber (E) from the reaction system (Fig. 9).【００４３】この方法では、検出部（Ｄ）に存在する検出用ハプテン−キャリア結合物のハプテン量と標識物質存在部（Ｃ）の標識抗体VII量により、両者による結合反応を競合阻止し得る最少の分析対象物ハプテン濃度（検出感度）が決定される。 [0043] In this way, the detection hapten present in the detection section (D) - minimum with a labeled antibody VII amount of hapten amount and the labeling substance present portion of the carrier bound substance (C), that can compete block binding reaction with both analyte hapten concentration (detection sensitivity) are determined.【００４４】試料中の分析対象物ハプテン濃度が検出感度より高い場合は、抗体固定部（Ｂ）の捕捉用抗体VI量に応じて一定量の分析対象物ハプテンを捕捉することにより、試料中の分析対象物濃度を減少させ、試料を検出感度まで希釈したのと同様の効果（希釈効果）が得られ、抗体固定部（Ｂ）の捕捉用抗体VI量の調整により、 [0044] If the analyte hapten concentration in the sample is higher than the detection sensitivity, by capturing a certain amount of the analyte hapten according to the capture antibody VI amount of the antibody fixing portion (B), in a sample analyte concentration reduces, sample the same effects as diluted to detection sensitivity (dilution effect) is obtained by adjusting the capture antibody VI amount of the antibody fixing portion (B),適切な幅で半定量することができる。 It can be semi-quantitatively with the appropriate width.【００４５】ここで、本発明で用いるハプテン抗体類は、コンベンショナルな抗体であっても、モノクロナール抗体であってもよく、公知の方法により作製することができる。 [0045] Here, haptens antibodies used in the present invention may be a conventional antibody may be a monoclonal antibody can be prepared by known methods.ハプテン（分析対象物）またはその化学的変性物を、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）等の抗原性を有する物質と結合させ、これを抗原として常法に従い、動物を免疫することにより抗血清を得、得られた抗血清中から、ハプテン（分析対象物）に対してのみ反応性を有する抗体を分離する。 The hapten (analyte) or a chemical modification thereof, is combined with a substance having the antigenicity of such bovine serum albumin (BSA), in a conventional manner so as antigen, obtained antiserum by immunizing an animal, from the obtained antiserum, separating the antibody having only reactive to the hapten (analyte).【００４６】モノクロナール抗体であれば、前記抗原で免疫したマウスの脾細胞と骨髄腫細胞を融合させ、目的の抗体を産生する融合細胞を選別し、この融合細胞から産生されるモノクロナール抗体を得る。 [0046] If the monoclonal antibody, said to antigen fusion of spleen cells with myeloma cells from mice immunized with, were selected fused cells that produce antibodies of interest, the monoclonal antibody produced from the fused cells obtain.【００４７】また、ハプテン−キャリア蛋白結合物または、ハプテン若しくはその化学的変性物を化学的に結合せしめたカルボキシル基含有水溶性モノオレフィン系高分子化合物の構成成分であるハプテンまたはその化学的変性物は、競合反応に関与するものであり、キャリア蛋白またはカルボキシル基含有水溶性モノオレフィン系高分子化合物は、標識物、クロマト材との結合部位を提供し、対応するハプテン抗体との反応性を高める等の役割を果すものである。 Further, hapten - carrier protein conjugate or the hapten or its chemically modified product to hapten or its chemically modified product is a component of chemically bound allowed carboxyl group-containing water-soluble monoolefinic polymer compound It is intended to participate in the competitive reaction, the carrier protein or a carboxyl group-containing water-soluble monoolefinic polymer compound, label, and provide a binding site for a chromatographic material, increasing the reactivity with the corresponding hapten antibody it is intended to play a role of equal.【００４８】キャリア蛋白としては、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ウサギ血清アルブミン（ＲＳＡ）、ヤギ血清アルブミン（ＧＳＡ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳ [0048] As the carrier protein, bovine serum albumin (BSA), rabbit serum albumin (RSA), goat serum albumin (GSA), human serum albumin (HSＡ）など血清由来の蛋白や卵白アルブミン（ＥＡ）等を用いることができる。 It can be used proteins and ovalbumin (EA) and the like from the serum such as A).なお、これらを使用する場合には、ハプテン抗体を作製する際にハプテンに抗原性を持たせる目的でこれらの蛋白（例えばＢＳＡ）を使用しているので、これらの蛋白に対して結合性を有する抗体を完全に吸収除去しておく必要がある。 Note that when using these, because it uses these proteins (e.g. BSA) in order to have antigenicity to a hapten in making the hapten antibody, capable of binding to these proteins antibody it is necessary to completely absorbing and removing.【００４９】ハプテンの化学的変性は、カルボキシル基含有水溶性モノオレフィン系高分子化合物（以下、スペーサーという）の官能基、例えば、カルボキシル基や水酸基と化学的に結合し得るようにハプテンに化学的修飾を加えるものである。 [0049] Chemical modification of haptens, carboxyl group-containing water-soluble monoolefinic polymer compound (hereinafter, referred to as spacer) functional group, for example, chemically hapten so as to bind to a carboxyl group or a hydroxyl group and a chemical it is intended to add a modification.化学的変性は、用いるハプテンの化学構造に応じて公知の方法により行なうことができる。 Chemical modification can be carried out by known methods depending on the chemical structure of the hapten to be used.特に、ハプテンにカルボキシル基、アミノ基、水酸基を導入する化学的変性方法が好ましい。 In particular, a carboxyl group to a hapten, an amino group, a chemical modification method of introducing a hydroxyl group is preferred.【００５０】本発明で使用するスペーサーは、生理的に不活性であり、一般に抗原性を有しない物質である。 The spacers used in the present invention are physiologically inert and generally no antigenic substance.スペーサーは、カルボキシル基の他に水酸基を有していてもよく、これらの官能基は、ハプテンまたはその化学的変性物との化学的結合に関与するだけでなく、高分子化合物であるスペーサーに水溶性を付与する役割を有する。 The spacer may have in addition to hydroxyl groups of the carboxyl groups, these functional groups not only involved in chemical binding to hapten or its chemically modified product, water in the spacer is a polymer compound It has a role to grant the sex.ここで、スペーサー（カルボキシル基含有水溶性モノオレフィン系高分子化合物）の「水溶性」とは、スペーサーの少なくとも１重量部が１０００重量部の蒸留水に完全に溶解し、透明な溶液を形成することを意味する。 Here, spacer (carboxyl group-containing water-soluble monoolefinic polymer compound) "Water-soluble" means that at least 1 part by weight of the spacer is completely dissolved in distilled water 1000 parts by weight, to form a clear solution it means that.【００５１】スペーサーの平均分子量は、約１０ 3 〜１ The average molecular weight of the spacer, about 10 3 to 1０ 7またはそれ以上であってもよく、通常数万〜数百万程度のものが好適である。 0 7 or more in a even better, it is usually preferable of about several tens of thousand to several million.【００５２】スペーサーの具体例としては、例えば、アクリル酸またはメタアクリル酸のホモ−またはコ−ポリマー；マレイン酸と酢酸ビニルとの共重合体またはそのケン化物、マレイン酸と例えばビニルアルコール、低級アルキルビニルエーテル、アクリル酸またはその低級アルキルエステル、メタアクリル酸またはその低級アルキルエステルとの共重合体またはそれらの加水分解物が挙げられる。 [0052] Specific examples of the spacer are, for example, homo- acrylic acid or methacrylic acid - or co - polymer; copolymer or a saponified maleic acid and vinyl acetate, maleic acid and such as vinyl alcohol, lower alkyl vinyl ether, acrylic acid or its lower alkyl esters, methacrylic acid or copolymers or their hydrolyzates and their lower alkyl esters.さらにスペーサーは、例えば、アクリル酸またはメタアクリル酸と、例えばアクリル酸のβ−ヒドロキシエチルエステルまたはアクリルアミドとの共重合物、あるいは前記モノマーを構成単位とする三元共重合体であってもよい。 Furthermore spacers, for example, acrylic acid or methacrylic acid, for example a copolymer of acrylic acid β- hydroxyethyl ester or acrylamide, or may be a ternary copolymer containing constituting units the monomers.【００５３】ハプテンまたはその化学的変性物とスペーサーとの化学的結合は、アミド結合またはエステル結合によって行なうが、特にアミド結合によるのが好ましい。 [0053] Chemical binding of haptens or their chemically modified products and the spacer is performed by an amide bond or an ester bond, preferably particularly by an amide bond.アミド結合を形成させる場合は、例えば、公知のカルボジイミド法、カルボニルジイミダゾール法、混合酸無水物法、活性エステル法、アジド法、酸クロリド法およびジフェニルホスホリルアジド（ＤＰＰＡ）法等が挙げられ、特にカルボジイミド法またはＤＰＰＡ法が好ましい。 If to form an amide bond, for example, a known carbodiimide method, carbonyldiimidazole method, mixed acid anhydride method, active ester method, azide method, acid chloride method and diphenylphosphoryl azide (DPPA) method, and the like, especially carbodiimide method or DPPA method is preferred.上記いずれの方法を用いてもよいが、ハプテンの有するスペーサーとの化学的結合に関与しない官能基の存在によっては不安定なものもあるので、あまり過激な条件を必要とする方法は避けるべきである。 Said any method may be used, but because also unstable by the presence of functional groups which do not participate in the chemical bonding of the spacer with the hapten, should be avoided methods requiring less extreme conditions is there.エステル結合の形成には、ハプテンまたはその化学的変性物の反応性水酸基とスペーサーのカルボキシル基を結合させる場合とその逆の場合がある。 The formation of an ester bond may if vice versa for coupling a reactive hydroxyl group and a spacer carboxyl group of the hapten or its chemically modified product.前者の場合には、スペーサーのカルボキシル基を反応性誘導体、例えば酸クロリドとしてハプテンの水酸基と反応させるか、あるいはスペーサーが例えば無水マレイン酸を含む共重合体であるならばそのままハプテンと反応させてもよい。 In the former case, even if the carboxyl group of the spacer reactive derivative, for example, is reacted with the hapten hydroxyl groups as the acid chloride, or the spacer is, for example, reacted with intact hapten if a copolymer containing maleic anhydride good.後者の場合もエステル結合の形成方法の原理は前者と同様であるが、 While the principles of the method of forming the well ester bonds in the latter case is similar to the former,ハプテンによっては、そのカルボキシル基を反応性誘導体、例えば酸クロリドに変換し得る程の安定性を有しないことがあり、この場合にはエステル結合を形成することは困難である。 Some haptens, its carboxyl group reactive derivative, it may for example have no stability extent that can be converted to the acid chloride, in this case it is difficult to form an ester bond.【００５４】次に、本発明の半定量装置を図１０、１１ Next, the semi-quantitative device of the present invention 10 and 11および１２に基づいて説明する。 And it will be described with reference to 12.図１０および１１は、 10 and 11,本発明の半定量装置の基本例である。 It is a basic example of a semi-quantitative system of the present invention.【００５５】本発明の半定量装置は、試料添加部（Ａ）、抗体固定部（Ｂ）、標識物質存在部（Ｃ）、検出部（Ｄ）および吸収部（Ｅ）を順次有するクロマト型の免疫化学的分析装置である。 [0055] Semi-quantitative device of the present invention, the chromatographic type having a sample addition portion (A), antibody fixing portion (B), the labeling substance present section (C), the detection section (D) and the absorption portion (E) sequentially it is a immunochemical analyzer.【００５６】図１０および１１で示した標識物質存在部（Ｃ）は、検出部（Ｄ）と同じクロマト材（Ｆ）上に位置していてもよいし、それぞれ独立した異なる材質のものであってもよい。 [0056] labeled substance presence portion shown in FIG. 10 and 11 (C) may be located on the detector (D) and the same chromatographic material (F), it is of independent different materials it may be.また、抗体固定部（Ｂ）は、標識物質存在部（Ｃ）および／または検出部（Ｄ）と異なる材質のものであってもよいし、標識物質存在部（Ｃ）および／または検出部（Ｄ）が設けられたのと同じクロマト材（Ｆ）上に設置してもよい。 The antibodies fixed part (B), the label material present section (C) and / or the detector may be one and the different material (D), the labeled substance presence portion (C) and / or the detector ( D) may be placed on the same chromatographic material (F) as is provided.【００５７】図１０(a)は、４段階の濃度での半定量を行なえる半定量装置を示したものであり、図１１(c) [0057] FIG. 10 (a), which showed perform semiquantitative device semiquantitative at a concentration of 4 stages, and FIG. 11 (c)は、６段階の濃度での半定量を行える半定量装置を示したものであるが、濃度の段階数は必要に応じて増減させることができる。 Is shows the semi-quantitative device capable of performing semi-quantitative at a concentration of 6 stages, the number of stages of the concentration can be increased or decreased as required.例えば、図１０(a)の半定量装置は、 For example, semi-quantitative device of FIG. 10 (a),４段階の濃度において共通の試料添加部（Ａ）と、抗体固定部（Ｂ）、標識物質存在部（Ｃ）、検出部（Ｄ）の３つの部位からなる独立した４つのユニットおよび共通の吸収部（Ｅ）から構成されており、各ユニットにおいて標識物質存在部（Ｃ）および検出部（Ｄ）における標識物質および検出用物質の量は同一であるが、抗体固定部（Ｂ）における捕捉用抗体の固定量は、ユニット毎に異なる。 Common sample application part at a concentration of 4 stages with (A), antibody fixing portion (B), the labeling substance present section (C), consists of three sites in the detector (D) four independent units and common absorption is composed of a part (E), the amount of the labeling substance and the detection substance in the labeled substance presence portion (C) and the detection unit (D) in each unit is the same, for the capture of the antibody fixing portion (B) a fixed amount of antibody is different for each unit.【００５８】試料添加部（Ａ）を共通にすることは、それぞれのユニットに分析対象物を含む試料を均一にクロマトさせるために必須である。 [0058] To the specimen application portion (A) in common, it is essential in order to uniformly chromatograph the sample containing the analyte to each of the units.そして、試料が各ユニットへより均一に移動するためには図１２(e)および(f)に示す構成配置が好ましい。 In order to sample moves more evenly to each unit is preferably configured and arranged shown in FIG. 12 (e) and (f).この場合には、吸収部（Ｅ） The, absorbing portion in this case (E)は各ユニット毎の構成となる。 Is the configuration of each unit.【００５９】本発明の半定量装置は、プラスチック板、 [0059] Semi-quantitative device of the present invention, a plastic plate,ガラス板、フィルム等、好ましくは両面粘着テープを貼ったプラスチック板やガラス板等の支持体（Ｇ）上に（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）の各部位を構成する材料を互に接し添加した試料が毛細管現象により部位（Ａ）から（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）と均一に移動できるように配置するか、図１１(d)のように、検出部（Ｄ） A glass plate, film or the like, the material preferably that on the support such as a plastic plate or a glass plate put a double-sided adhesive tape (G) (A), constituting each site of (B), (C), (D) from site (a) by mutually contacting the sample capillarity added (B), (C), or arranged so as to be uniformly moved (D), as shown in FIG. 11 (d), the detector ( D)を含むクロマト材および抗体固定部（Ｂ）が支持体（Ｇ）に直接触れないように配置する。 Chromatographic materials and antibody fixing portion comprising (B) is arranged so as not touch the support (G).【００６０】次に、本発明の半定量装置の各部の構成について説明する。 [0060] Next, the configuration of each part of the semi-quantitative device of the present invention.試料添加部（Ａ）試料添加部の材質は、セルロース濾紙、ガラス繊維、ポリウレタン、ポリアセテート、酢酸セルロース、ナイロン、綿布等の均一な特性を有するものが挙げられるが、 The material of the sample addition portion (A) sample addition part is cellulose filter paper, glass fibers, polyurethane, polyacetate, cellulose acetate, nylon, but are not limited to, those having uniform characteristics of cotton or the like,これらに限定されるものではない。 But it is not limited thereto.【００６１】試料添加部は、添加された分析対象物を含む試料を受入れるだけでなく、試料中の不溶物粒子等を濾過する機能をも兼ねるので、セルロース濾紙、ガラス繊維濾紙等の濾過機能をも有する材質のものが好ましい。 [0061] A sample-adding portion not only receive a sample containing an added analyte, since but also acts to filter off insoluble particles, etc. contained in the sample, cellulose filter paper, a filtration function such as glass fiber filter paper preferably of a material that also has.【００６２】試料中の分析対象物が試料添加部の材質に非特異的に吸着し、半定量の精度を低下させることを防止するため、試料添加部を構成する材質は、予め非特異的吸着防止処理して用いることが特に好ましい。 [0062] analyte in the sample is non-specifically adsorbed on the material of the specimen application portion, to prevent the lowering of the semi-quantitative accuracy, the material of the sample addition portion, previously non-specific adsorption it is particularly preferable to use a prevention treatment.非特異的吸着防止処理としては、例えば、不活性蛋白による処理、界面活性剤による処理等がある。 The non-specific adsorption prevention treatment, e.g., treatment with an inert protein, there is a treatment by a surfactant.不活性蛋白による処理は、例えば、材質を０．１〜１０％牛血清アルブミン（ＢＳＡ）０．１Ｍトリス緩衝液（ｐＨ６〜９）溶液、０．１〜１０％脱脂粉乳０．１Ｍトリス緩衝液（ｐ Treatment with an inert protein, for example, the material 0.1% to 10% bovine serum albumin (BSA) 0.1M Tris buffer (pH 6-9) solution, 0.1% to 10% non-fat dry milk 0.1M Tris buffer (pＨ６〜９）溶液、および／または０．１〜１０％カゼイン溶液などに浸し、３７℃１時間または４℃一昼夜放置後、トリス緩衝液で洗浄後乾燥させることからなる。 H6～9) solution, and / or soaked in such 0.1% to 10% casein solution was allowed to stand 37 ° C. 1 hour or 4 ° C. overnight, consists in drying after washing with Tris buffer.界面活性剤による処理は、例えば、材質を非イオン性界面活性剤であるツイーン２０またはトリトンＸ１００の０．０１〜１％溶液に浸し、そのまま乾燥することからなる。 Treatment with surfactant, for example, soaked in 0.01% to 1% solution of Tween 20 or Triton X100 is a nonionic surfactant material consists directly dried.分析対象物、試料の種類によるが、不活性蛋白による処理と界面活性剤による処理を合わせて行なってから使用するのが好ましい。 Analyte, depending on the type of sample, preferably used after performing combined processing by the processing and surfactants with an inert protein.【００６３】 抗体固定部（Ｂ）抗体固定部の材質は、均質な特性を有し、捕捉用抗体の固定量を厳密に規定することができ、さらに大きさ、厚さ等の加工も容易なものが好ましい。 [0063] The material of the antibody fixing portion (B) antibody fixing portion has a uniform characteristic, a fixed amount of capture antibody can be strictly defined, and further size, also processing such as thickness easy It is preferred.【００６４】分析対象物の捕捉用抗体の固定量（濃度） [0064] a fixed amount of capture antibody analyte (concentrations)が大きい半定量を目的とする場合には活性化された濾紙を使用し、これに捕捉用抗体を化学的に結合するのが好適である。 In the case of an object is large semiquantitative using activated filter paper, it is preferred to chemically bind the capture antibody thereto.ＣＮＢｒ・活性化セルロースであればＣｅｓ If the CNBr · activated cellulose Cesｋａ ａｎｄ Ｌｕｎｄｋｖｉｓｔの方法（［Immunoch The method of ka and Lundkvist ([Immunochemistry, 9 , 1021 (1972)やLehtone and Viljanenらの方法］、［J. Immunol. Methods, 36 , 63 (1980)および同, 34 , 61 (1980)]）、ＤＢＭ・活性化セルロースであればＡｌｗｉｎｅの方法（Methods Enzymol., 68 , 220 emistry, 9, 1021 (1972) and Lehtone and Viljanen's method], [J. Immunol. Methods , 36, 63 (1980) and ibid., 34, 61 (1980)]), if DBM · activated cellulose Alwine method (methods Enzymol., 68, 220(1979)）等の公知の方法により容易に活性化セルロース濾紙の調製を行なうことができる。 (1979)) by a known method such as can be performed easily prepared activated cellulose filter paper.また、市販の活性化ナイロン膜（ポールイムノダイン）を用いることもできる。 It is also possible to use commercially available activated nylon film (Paul immuno dynes).【００６５】上記の様な活性化ペーパーへの捕捉用抗体の化学結合も公知の方法に準じて行なうことができる（LABORATORY TECHNIQUES IN BIOCHEMISTRY AND MOLECU [0065] Also the chemical attachment of the capture antibody to the above such activation paper can be carried out according to known methods (LABORATORY TECHNIQUES IN BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY, Volume 15, Edited by RH BURDON and LAR BIOLOGY, Volume 15, Edited by RH BURDON andPH VanKNIPPENBERG ELSEVIER AHSTERDAM:NEW YORK, PH VanKNIPPENBERG ELSEVIER AHSTERDAM: NEW YORK,OXFORD (1985) P.318-322）。 OXFORD (1985) P.318-322).また、活性化ペーパーに第２物質（抗体、蛋白等）を介して捕捉用抗体を結合することもできる。 It is also possible to combine the capture antibody through a second substance (antibody, protein, etc.) to the activated paper.介在する第２物質が抗体（以下、第２ Second material interposed antibody (hereinafter, second抗体という）の場合は、例えば固定化される捕捉用抗体がマウス由来のモノクロナール抗体の場合は、抗マウスγＧ（ガンマグロブリン）異種動物抗体を活性化ペーパーに過剰に結合させた後、捕捉用抗体を適量免疫反応で結合させて用いることができる。 For that antibodies), for example, when the capture antibody is immobilized monoclonal antibodies from mice after excessively coupled to anti-mouse .GAMMA.g (gamma globulin) heterologous animal antibodies activation paper, seizure antibodies can be used by coupling with an appropriate amount immune reaction.介在する物質が蛋白である場合は、例えば、活性化ペーパーにプロテインＡを過剰に結合させた後、捕捉用抗体を適量結合させて用いることができる。 When intervening material is a protein, for example, after excessive binding protein A to the activated paper, can be used capture antibody by an appropriate amount bound.【００６６】また、分析対象物を捕捉する捕捉用抗体の固定量（濃度）が少ない半定量を目的とする場合には、 [0066] Further, a fixed amount of capture antibody to capture an analyte (concentrations) is less semiquantitative if of interest,クロマト材の標識物質存在部（Ｃ）より上流部に検出部（Ｄ）における検出用抗体（物質）の固定化と同様の方法にて捕捉用抗体を固定化することができる。 It is possible to immobilize the capture antibody at the immobilized a manner similar to detection antibody (substance) in the detection unit in the upstream of the labeled substance presence portion of the chromatographic material (C) (D).【００６７】 標識物質存在部（Ｃ）標識物質存在部は、後述の検出部（Ｄ）に検出用物質を固定化し、分析対象物、標識物質の非特異的吸着防止処理をした後、標識物質をクロマト材の検出部（Ｄ）より上流部に塗付するか、またはセルロース濾紙、ガラス繊維濾紙、不織布などを非特異的吸着防止処理をした後、 [0067] labeling substance present section (C) labeled substance presence portion, after immobilizing the detection substance to the detection unit will be described later (D), the analyte, the non-specific adsorption prevention treatment of the labeling substance, a labeling substance after either with paint in the upstream of the detection part of the chromatographic material (D), or cellulose filter paper, glass fiber filter paper, non-specific adsorption prevention treatment such as non-woven fabric,標識物質の一定量を含浸し、乾燥させて作製する。 A fixed amount of labeled material was impregnated to produce dried.【００６８】本発明の半定量法において、標識物質の溶解速度、クロマト移動の均一性が測定感度の制御に影響を及ぼす場合があるので、前記非特異的吸着防止処理と共に標識物質のクロマト材への塗付または含浸は、０． [0068] In the semi-quantitative method of the present invention, the dissolution rate of the labeled substance, the uniformity of the chromatographic movement may affect the control of the measurement sensitivity, the chromatographic material of the labeling substance together with the non-specific adsorption prevention treatment coating with or impregnation of, 0.１〜１０％マンニトールまたは０．１〜３０％サッカロース等の糖類の存在下で行なうことが好ましい。 It is preferably carried out in the presence of sugars such as 1-10% mannitol or 0.1 to 30% sucrose.【００６９】 検出部（Ｄ）検出部は、クロマト材の一部に検出用物質を固定化させて作製する。 [0069] Detection unit (D) detection unit is prepared by immobilizing a detection substance on a part of the chromatographic material.検出用物質の固定化方法には、検出用物質をクロマト材の一部に物理的または化学的結合により直接固定化させる方法と、検出用物質をラテックス粒子などの微粒子に物理的または化学的に結合させ、この微粒子を多孔性のクロマト材の一部にトラップさせて固定化させる間接固定化方法がある。 A method of immobilizing the detection substance is a substance for detection and a method for directly immobilized by physically or chemically binding to a portion of the chromatographic material, the detection material physically or chemically microparticles such as latex particles binding is, by trapping the particulates in a portion of the porous chromatographic material is an indirect immobilization method for immobilization.いずれの方法も用いることができるが、本発明の装置においては、不溶化の均一性、感度調整の容易さ等から直接固定化の方が好ましい。 It can be used any of a method, in the apparatus of the present invention, the uniformity of insolubilization, towards immobilized directly from easiness of sensitivity adjustment is preferred.【００７０】検出部を構成する材質（クロマト材）は、 [0070] The material constituting the detecting section (chromatographic material),多孔性ニトロセルロース膜、多孔性セルロース膜、ナイロン膜、ガラス繊維、不織布、布等、またはこれらに検出用物質結合用の活性基の有るものが好ましく、特に多孔性ニトロセルロース膜および活性化ナイロン膜が好ましい。 Porous nitrocellulose membrane, a porous cellulose membrane, nylon membrane, glass fiber, nonwoven fabric, cloth, or preferably one having the active group for detection substance bound thereto, in particular porous nitrocellulose membrane and activation nylon membrane It is preferred.【００７１】クロマト材への検出用物質の固定化の形状は、特に限定されるものではなく、いかなる形状であってもよいが、クロマト先端部に対し、標識物質の検出が均一となるクロマト材を横断した線形が特に好ましい。 [0071] The shape of the immobilization of the detection substance to chromatographic material is not particularly limited, may be any shape, but with respect to chromatographic tip chromatographic material that detection of the labeled substance becomes homogeneous linear traversing the particularly preferred.【００７２】なお、クロマト材は、検出用物質を固定化後、不活性蛋白による処理等により非特異的吸着防止処理をして用いるのが好ましい。 [0072] Incidentally, chromatographic material, after immobilization of the detection substance, preferably used in the non-specific adsorption prevention treatment by treatment by an inert protein.【００７３】 吸収部（Ｅ）吸収部は、添加された試料がクロマト移動により物理的に吸収されると共に検出部（Ｄ）に不溶化されない未反応標識物質等を吸収除去する部位であり、セルロース濾紙、不織布、布、セルロースアセテート等吸水性材料が用いられる。 [0073] absorber (E) absorbing portion, the added sample is a portion for removing absorbed unreacted labeling substance and the like that are not insolubilized in the detection portion (D) while being physically absorbed by chromatographic movement, cellulose filter paper , a nonwoven fabric, a cloth or cellulose acetate absorbing materials such as a.【００７４】添加された試料のクロマト先端部が吸収部に届いてからのクロマトの速度は、吸収材の材質、大きさなどにより異なるので、その選定により分析対象物の測定に合った速度を設定することができる。 [0074] The chromatographic speed after the chromatographic leading end of the added sample has reached the absorbing portion, made of absorbent material, differs by size, etc., set the match rate to the measurement of the analyte by that selection can do.【００７５】以上、本発明の半定量装置の各部位の構成について説明したが、装置の製造に際し各部の材質、大きさ、厚さ等のファクターによりクロマト速度（液の流れ速度）が異なる。 [0075] Having described the structure of each part of the semi-quantitative device of the present invention, each part of the material in the production of the device, size, chromatographic speed by a factor such as a thickness (flow rate of the liquid) are different.従って、分析対象物の種類に応じて最も好適に半定量が行ない得るようにこれらのファクターは、自由に選択し設定できる。 Thus, these factors so that the most suitable semi-quantitatively depending on the type of analyte can perform can be selected freely set.【００７６】本装置における測定感度は、主に検出部（Ｄ）に固定化されている検出用物質量と標識物質存在部（Ｃ）の標識物質量によって決まる。 Measurement sensitivity in [0076] the device is determined by the amount of the labeling substance mainly detecting unit for detecting the amount of substance is immobilized on (D) and the labeling substance present section (C).また、本発明の半定量におけるいわゆる希釈効果は、原理的には、抗体固定部（Ｂ）の捕捉用抗体の固定量に依存しているが、 Moreover, so-called dilution effect in the semi-quantitative determination of the present invention, in principle, rely on a fixed amount of capture antibody an antibody fixing portion (B),半定量の精度は、試料添加部（Ａ）から検出部（Ｄ）までの試料の流れ方向のクロマト材の長さおよび厚さ、即ち希釈効果を維持した試料の通過液量に依存している。 Semiquantitative accuracy is dependent sample addition part (A) to the length and thickness of the detector (D) to the sample in the flow direction of the chromatographic material, i.e. the flow-through amount of the sample was maintained dilution effect .特に試料添加部（Ａ）から抗体固定部（Ｂ）に浸透した液量の内、抗体固定部（Ｂ）にて希釈効果を得た状態の試料液量が標識物質存在部（Ｃ）の標識物質を完全に溶解して検出部（Ｄ）に移動させるに足る液量であることが本発明の半定量を精度よく行なう上で最も重要である。 Especially among the specimen application portion antibody fixing portion from (A) (B) to the permeated liquid amount, labeled antibody fixing portion sample liquid amount of state to obtain a dilution effect with (B) a labeled substance presence portion (C) it is most important to perform well semiquantitative of the present invention precision substance is a liquid amount sufficient to move the detection unit (D) was completely dissolved.【００７７】即ち、抗体固定部（Ｂ）において捕捉用抗体の固定量に応じて分析対象物の一定量が捕捉されて希釈効果を得た状態の試料が、標識物質を検出部（Ｄ）まで完全にクロマト移動させることにより、クロマト完了後に捕捉用抗体が飽和となり、元の分析対象物濃度の試料が検出部（Ｄ）に流れてきても標識物質のクロマトはすでに終了しているため、検出部（Ｄ）における反応は影響を受けず、判定結果が変動することはない。 [0077] That is, the state of the sample constant weight to obtain a dilution effect is captured analyte depending on a fixed amount of capture antibody in the antibody fixing portion (B) is, until the labeled material detection unit (D) by completely chromatographically moved, the capture antibody is saturated after chromatographic completion, because even sample of the original analyte concentration is flowed to the detector (D) has been completed already chromatographic labeling substance, detecting reaction in part (D) are not affected, the determination result does not vary.【００７８】従って、抗体固定部（Ｂ）の大きさ、即ち抗体固定部（Ｂ）を希釈効果を得た状態で通過する試料の液量が、標識物質を検出部（Ｄ）まで完全にクロマト移動させるに充分な液量であることが希釈効果を確実にするために必須である。 [0078] Therefore, the size of the antibody fixing portion (B), i.e. the amount of liquid sample antibody fixing portion (B) passes while receiving a dilution effect, completely chromatographic labeled substance to the detection unit (D) it is sufficient liquid volume in order moved is essential to ensure dilution effect.【００７９】なお、標識物質存在部（Ｃ）の構成の説明中に記載した様に、クロマトに際し、標識物質が容易に試料に溶解し、移動することも精度向上のために重要な点である。 [0079] Incidentally, as described in the description of the structure of the labeled substance presence portion (C), upon chromatographic, labeling material easily dissolved in the sample, it is also an important point to improve the accuracy of moving .【００８０】 【実施例】以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明する。 [0080] EXAMPLES Hereinafter, a more detailed description of the present invention through examples.【００８１】実施例１ ｈＣＧ（ヒト胎盤性性腺刺激ホルモン）の測定１−ａ） 抗ｈＣＧモノクロナール抗体の製造 Ｂａｌｂ／ｃマウスにｈＣＧ（１００００ｉｕ／ｍｇ） [0081] Example 1 hCG (human chorionic gonadotropin) Measurement 1-a) anti-hCG monoclonal antibody of manufacturing Balb / c mice of hCG (10000 IU / mg)をコンプリートフロインドアジュバントと共に３週間隔で３回背部皮下投与し、更に３週後ｈＣＧを腹腔内投与した。 Was 3 times the back subcutaneously with 3 week intervals with complete Freund's adjuvant, was administered further 3 weeks after hCG intraperitoneally.最終免疫３日後の脾細胞と骨髄腫細胞（ＮＳ− 3 days after the final immunization of spleen cells with myeloma cells (NS-１）とを常法により細胞融合を行い、ＨＡＴ選別後、クローニングを繰返してｈＣＧ特異抗体を分泌する融合細胞株ならびにｈＣＧ、ｈＬＨ、ｈＦＳＨと交差反応するα−サブユニットを認識するモノクロナール抗体を分泌する融合細胞株を得た。 1) and was subjected to cell fusion by a conventional method, after HAT selection, the fused cell lines as well as hCG secreting hCG specific antibodies by repeating the cloning, hLH, a monoclonal antibody that recognizes the α- subunit that cross-react with hFSH to obtain a secreted fusion cell lines.各細胞株を予めプリスタン投与したＢａｌｂ／ｃマウスの腹腔内に投与し、腹水腫瘍を形成させて腹水を得た。 It was administered intraperitoneally Balb / c mice, previously pristane administration of each cell line was obtained ascites by forming ascites tumor.得られた腹水を硫安分画及びアフイゲル−プロテインＡマプスキットにより精製し、凍結乾燥して白色粉末のモノクロナール抗体を得た。 The resulting ascites ammonium sulfate fractionation and Afuigeru - purified by protein A Mapusukitto to obtain monoclonal antibodies of the white powder and freeze-dried.得られた抗ｈＣＧ特異的モノクロナール抗体は抗体固定部（Ｂ）及び検出部（Ｄ）の作製に用い、α−サブユニットを認識するモノクロナール抗体は標識抗体作製に用いた。 Anti-hCG specific monoclonal antibodies obtained are used for producing the antibody fixing portion (B) and the detector (D), alpha-subunit recognizing monoclonal antibody was used for labeling the antibody produced.【００８２】１−ｂ） 着色ラテックス標識抗ｈＣＧ特異 [0082] 1-b) colored latex-labeled anti-hCG specific抗体の製造 １−ａ）で得られた抗ｈＣＧ特異的モノクロナール抗体４ｍｇを２ｍｌのグリシン緩衡液（ｐＨ８．２）に溶解したのち、攪拌下に赤色ポリスチレンラテックス（固形分１０％、日本合成ゴム社製、粒径０．３０３μｍ） After dissolving the anti-hCG specific monoclonal antibody 4mg obtained in Preparation 1-a) of the antibody in glycine slow衡液(pH 8.2) in 2 ml, red polystyrene latex under agitation (10% solids, Nippon Synthetic rubber Co., Ltd., particle size 0.303μm)１．０ｍｌを滴下混合し、室温で３０分間及び５６℃で３０分間攪拌を続けた。 It was added dropwise mixed 1.0 ml, and stirring was continued for 30 minutes at 30 minutes and 56 ° C. at room temperature.次いで冷却後、遠心分離した。 Then after cooling and centrifuged.得られた沈殿をグリシン緩衡液１０ｍｌに懸濁して遠心分離する操作を２回繰り返した後、沈殿を１％ＢＳＡ含有グリシン緩衡液１０ｍｌに懸濁させ、室温で１時間攪拌した後、遠心分離した。 The resulting precipitate was repeated twice to centrifugation and suspended in glycine slow 衡液 10 ml, precipitation was suspended in 1% BSA-containing glycine loose 衡液 10 ml, after stirring for 1 hour at room temperature, centrifuged separated.グリシン緩衝液による遠心洗浄操作を３回繰り返した後、沈殿を５％サッカロース、 After repeating three times the centrifugal washing operation with glycine buffer, precipitated with 5% saccharose,２．５％マンニトール、０．１％ＢＳＡ含有グリシン緩衡液２０ｍｌに懸濁し、抗ｈＣＧ特異的モノクロナール抗体感作着色ラテックスを製造した。 2.5% mannitol, was suspended in 0.1% BSA-containing glycine loose 衡液 20 ml, was prepared anti-hCG specific monoclonal antibody-sensitized colored latex.【００８３】１−ｃ） 試料添加部（Ａ）の製造 クロマトグラフィー用濾紙（アドバンテック東洋社製、 [0083] 1-c) manufacturing chromatographic filter paper specimen application portion (A) (Advantec Toyo Co.,Ｎｏ． No.５８５、厚さ０．８５ｍｍ）をカットして１０× 585, thickness 0.85mm) cut to 10 ×２１ｍｍの濾紙片を作製し、これを、５％脱脂粉乳（全国酪農連合会）含有０．１Ｍトリス緩衡液（ｐＨ８． To prepare a filter paper piece of 21mm, which, 5% non-fat dry milk (the National Dairy Association) containing 0.1M Tris loose 衡液 (pH8.２）溶液に浸漬して３７℃１時間インキュベーション後、０．１Ｍトリス緩衡液（ｐＨ８．２）にて１回洗浄後、５％ＢＳＡ（バイオセル社製）含有０．１Ｍトリス緩衡液（ｐＨ８．２）溶液に浸漬した。 2) later immersed in a solution 37 ° C. 1 hour incubation, washed once with 0.1M Tris slow 衡液 (pH 8.2), manufactured by 5% BSA (Biocell, Inc.) containing 0.1M Tris slow 衡液 ( pH8.2) was immersed in the solution.３７℃１時間インキュベーション後、０．１Ｍトリス緩衡液（ｐＨ８． After 37 ° C. 1 h incubation, 0.1 M Tris slow 衡液 (pH 8.２）で１回洗浄、液切り後、０．０５％ツイーン２０含有０．１Ｍトリス緩衡液に浸した後、液切りして室温にて乾燥させた。 Washed once with 2), after draining, after immersion in 0.05% Tween 20 containing 0.1M Tris loose 衡液 and dried at room temperature draining.【００８４】１−ｄ） 抗体固定部（Ｂ）の製造 イ）ＣＮＢｒ活性化セルロ−ス濾紙の作製セルロース濾紙（アドバンテック東洋社製、Ｎｏ．５ [0084] 1-d) producing b antibody fixing portion (B)) CNBr activated cellulose - scan filter paper produced cellulose filter paper (Advantec Toyo Co., No.5０）を１０×２０ｍｍの濾紙片に切断し、この２ｇを２ 0) was cut into a piece of filter paper of 10 × 20 mm, the 2 g 2０ｍｌの精製水に浸して膨潤させた後、６０ｍｌのＣＮ After swelling immersed in purified water 0ml, 60ml of CNＢｒ溶液（２．０ｇのＣＮＢｒを６０ｍｌの精製水に溶解）を加え、直ちに攪拌下、１ＮＮａＯＨによりｐＨ１ Br solution (dissolved CNBr of 2.0g of purified water 60ml) was added, pH 1 immediately under stirring, by 1NNaOH０．５に調整し、引き続き１ＮＮａＯＨにより３０分間ｐＨを１０．５に維持した。 It was adjusted to 0.5 and maintained for 30 minutes pH to 10.5 by subsequently 1N NaOH.反応終了後、濾紙片を５０ After completion of the reaction, a piece of filter paper 50ｍｌのＮａＨＣＯ 3で１２回洗浄後、５０ｍｌの精製水で２回洗浄後、５０ｍｌの２０％アセトン、５０％アセトン、７０％アセトン、アセトンで各２回洗浄し、室温で乾燥させた。 After NaHCO 3 at 12 washes ml, washed twice with distilled water 50 ml, 20% acetone in 50 ml, and washed twice each with 50% acetone, 70% acetone, acetone, and dried at room temperature.このＣＮＢｒ活性化セルロース濾紙は抗体の固定まで４℃に保存した。 The CNBr activated cellulose filter paper was stored in 4 ° C. until the fixed antibody.【００８５】ロ）抗ｈＣＧ特異的モノクロナール抗体固定セルロース濾紙の作製１−ａ）で製造した抗ｈＣＧ特異的モノクロナール抗体をカップリング緩衝液（０．１ＭＮａＨＣＯ 3含有０． [0085] b) anti-hCG specific production of monoclonal antibody-immobilized cellulose filter paper 1-a) anti-hCG specific monoclonal antibodies produced in the coupling buffer (0.1M NaHCO 3 containing 0.５ＭＮａＣｌ，ｐＨ８．３）にて０、０．１、０．２および０．４ｍｇ／ｍｌの濃度の溶液を調製し、各５ｍｌ 5M NaCl, to prepare a solution having a concentration of the 0,0.1,0.2 and 0.4 mg / ml at pH 8.3), each 5mlに上記イ）で作製したＣＮＢｒ活性化セルロース濾紙１ The) CNBr activated cellulose filter paper 1 produced in the０枚ずつを浸漬し、ゆっくり攪拌しながら室温で３時間反応させた。 By 0 sheets was immersed and allowed to react for 3 hours at room temperature with stirring slowly.反応終了後、濾紙片をカップリング緩衝液にて２回洗浄後、各５ｍｌの１Ｍエタノールアミン溶液に浸漬し、室温で２時間ゆっくり攪拌して未反応のＣＮ After completion of the reaction, it was washed twice with a piece of filter paper in coupling buffer, were immersed in 1M ethanolamine solution in each 5 ml, unreacted stirred gently at room temperature for 2 hours CNＢｒ活性基をブロックした後、０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐ After blocking the Br active group, 0.1 M acetate buffer (pＨ４．０）−０．１Ｍトリス緩衝液（ｐＨ８）で３回洗浄後、室温で乾燥させ、使用時まで４℃に保存した。 H4.0) 3 times washed with -0.1M Tris buffer (pH 8), and dried at room temperature and stored at 4 ° C. until use.【００８６】１−ｅ） 検出部（Ｄ）の製造 ニトロセルロース膜（ザルトリウス社製、孔径８μｍ） [0086] 1-e) detecting section (D) of manufacturing a nitrocellulose membrane (Sartorius, pore size 8 [mu] m)を３０×５０ｍｍの大きさに切断し、カマグ・リノマット（Ｃａｍｍｇ Ｌｉｎｏｍａｔ）ＩＶを用いて中心部（１５ｍｍ）に１−ａ）で作製した抗ｈＣＧ特異的モノクロナール抗体の１ｍｇ／ｍｌ溶液（５０μｇ／ｍｌＢ It was cut into a size of 30 × 50 mm, Kamagu-Rinomatto (Cammg Linomat) of anti-hCG specific monoclonal antibodies prepared in the central portion with IV (15 mm) to 1-a) 1mg / ml solution (50 [mu] g / mlBＳＡ含有５０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ８．２））の１０ SA containing 50mM Tris buffer 10 (pH 8.2))μｌを線型にスプレイ後、２５℃、湿度８０％の恒温恒湿器中に２５分間放置し、次いで０．１Ｍトリス緩衝液（ｐＨ８．２）に５％脱脂粉乳（全国酪農連合会）を溶解した溶液、５％ＢＳＡ溶液に浸漬してブロッキングした後、１％サッカロース、１％マンニトール含有０．１ After spraying the μl linearly, 25 ° C., allowed to stand for 25 minutes in 80% of the thermo-hygrostat and humidity, then dissolved with 5% non-fat dry milk (National Dairy Federation) in 0.1M Tris buffer (pH 8.2) solution, was blocked by immersion in 5% BSA solution, 1% sucrose, 1% mannitol containing 0.1Ｍトリス緩衝液にて洗浄し、室温に放置して乾燥させた。 Washed with M Tris buffer, allowed to dry to room temperature.【００８７】１−ｆ） 標識物質存在部（Ｃ）の製造 １−ｅ）で製造した検出部（Ｄ）を含むニトロセルロース膜の線型に固定した検出部に平衡に一端から５ｍｍの位置にカマグ・リノマットＩＶを用いて１−ｂ）で作製した着色ラテックス標識抗ｈＣＧ抗体２０μｌを線型にスプレイし、室温で乾燥させ、使用時まで４℃に保存した。 [0087] 1-f) Kamagu labeled substance presence portion from manufacturing 1-e) one equilibrium detector fixed to the linear nitrocellulose membrane containing the detector produced (D) in the (C) the position of 5mm · Rinomatto using IV sprayed colored latex-labeled anti-hCG antibody 20μl prepared linearly at 1-b), dried at room temperature and stored at 4 ° C. until use.【００８８】１−ｇ） 装置の製造 １−ｆ）で製造した検出部（Ｄ）及び標識物質存在部（Ｃ）を含むニトロセルロースの幅５０ｍｍを４ｍｍずつに切断して４×３０ｍｍの短冊とし、また、１−ｄ） [0088] 1-g) and a strip of 4 × 30 mm width 50mm nitrocellulose was cut one by 4mm including the detection unit produced in Production 1-f) of the device (D) and the labeled substance presence portion (C) In addition, 1-d)で各抗体溶液で作製した抗ｈＣＧ特異的モノクロ−ナル抗体固定セルロース濾紙についても４×７ｍｍの短冊を作製した。 In anti-hCG specific monochromatic produced in each antibody solution - to produce a strip of 4 × 7 mm also monoclonal antibody fixed cellulose filter paper.図１０(b)に示すように、ガラス板上に画面粘着テープを貼った支持体（Ｇ）上に、上記検出部（Ｄ）及び標識物質存在部（Ｃ）を含むニトロセルロース膜の短冊を図１０(a)に示すように、１ｍｍ間隔で４ As shown in FIG. 10 (b), on a support which put a screen adhesive tape on a glass plate (G), the detector (D) and the labeled substance presence portion a strip of nitrocellulose membrane containing (C) as shown in FIG. 10 (a), 4 at 1mm intervals枚、平行に並べて貼り、各々について抗ｈＣＧ特異的モノクロナール抗体固定セルロース濾紙の短冊を右端に１ Like, attached side by side in parallel, each strip of anti-hCG specific monoclonal antibody-immobilized cellulose filter paper to the right end for the 1ｍｍの重なりをもって貼り、さらに右端に１ｍｍの重なりを持って１−ｃ）で製造した試料添加部（Ａ）を貼った。 mm overlap paste with a a, stuck the specimen application portion prepared in 1-c) (A) with overlap of 1mm further to the right end.一方、膜の左端には吸収部（Ｅ）としてクロマトグラフ用セルロース濾紙(アドバンテック東洋社製、Ｎ On the other hand, the absorption unit to the left end of the film (E) as chromatographic cellulose filter paper (Advantec Toyo, Nｏ． o.５８５）の１０×２１ｍｍの濾紙片を１ｍｍの重なりを持って貼り、各々の連結を確実なものとした。 Paste the filter paper piece of 10 × 21 mm of 585) with an overlap of 1 mm, it made sure each connection.同様にして本装置を５枚作製した。 The present device was made five similarly.【００８９】１−ｈ） 測定 ｈＣＧを０、１０、２０、３０および４０ｉｕ／ｌ含有する尿を試料とし、これらの試料を１−ｇ）で製造した装置各々の試料添加部（Ａ）に２００μｌずつ添加した。 [0089] 1-h) measuring hCG 0, 10, 20, 30 and 40 IU / l urine containing the sample, 200 [mu] l in the sample application part of the apparatus respectively manufactured these samples 1-g) (A) each was added.試料中のｈＣＧは抗体固定部（Ｂ）において捕捉用抗体量に応じて一定量捕捉された後、着色ラテックス標識抗体と結合してクロマト移動し、検出部（Ｄ）において線型に固定化されている抗ｈＣＧ特異的モノクロナール抗体に結合し、未反応標識抗体および試料溶液はクロマト移動により吸収部（Ｅ）に移動後、検出部（Ｄ）における標識物由来の呈色を観察した。 After hCG in the sample which is a predetermined amount trapped in accordance with the capture antibody amount in the antibody fixing portion (B), coupled with colored latex-labeled antibody was chromatographed move, immobilized linearly in the detection unit (D) bound to the anti-hCG specific monoclonal antibodies are, unreacted labeled antibody and the sample solution after the movement to the absorption unit (E) by chromatographic movement was observed coloration from labeling substance in the detection section (D).【００９０】本装置における検出感度は、検出部（Ｄ） [0090] Detection sensitivity of the device, the detection unit (D)に固定化された抗ｈＣＧモノクロナール抗体量と、標識物質存在部（Ｃ）の着色ラテックス標識抗体量により１ And anti-hCG monoclonal antibody amount immobilized on one by colored latex-labeled antibody of the labeled substance presence portion (C)０ｉｕ／ｌと設定し、抗体固定部（Ｂ）の捕捉用抗体量、寸法等により半定量幅を設定した。 Set to 0 IU / l, capture antibody of the antibody fixing portion (B), was set semiquantitative width by dimension, or the like.【００９１】各試料を添加した装置の検出部（Ｄ）の呈色は表１(a)に示す通りであった。 [0091] coloration detector device with the addition of each sample (D) was as shown in Table 1 (a).表１(b)には、赤色の線型が認められた場合を「＋」、認められなかった場合を「−」として表示した。 Table 1 (b), a case where the red of linear was observed "+", a case that was not observed - was displayed as "".【００９２】 【表１】 [0092] [Table 1]【００９３】表１に示す如く、本発明によれば試料中のｈＣＧを１０ｉｕ／ｌの濃度幅で精度よく半定量できることが判った。 [0093] As shown in Table 1, it was found that the hCG in the sample according to the present invention can be precisely semiquantitative concentration range of 10 IU / l.なお、ここでは示さなかったが、ｈＣＧ Although not shown here, hCG未知濃度の試料を精度よく半定量するには、先ず、固定抗体量の幅を大きく設定して、例えば１０００、２０ To accurately semiquantitative samples of unknown concentration, first, by setting a large width of the fixed amount of antibody, for example 1000,20０、４０および０ｉｕ／ｌの４段階で半定量を行い、次いで、例えば、試料中のｈＣＧの濃度が０〜４０ｉｕ／ Perform semi-quantitative in four stages of 0, 40 and 0 IU / l, then, for example, the concentration of hCG in the sample 0～40Iu /ｌの範囲であれば、上記実施例１のようにして半定量することが好ましい。 Be in the range of l, it is preferable to semi-quantitatively as above in example 1.また、試料が他の範囲の濃度の場合には、各々の濃度域に応じて半定量できるユニットを作製して用いるのが好ましい。 Further, when the sample is a concentration of the other range is preferably used to prepare a unit capable semiquantitative depending on each density range.【００９４】実施例２ ｈＬＨ（ヒト黄体形成ホルモン）の測定２−ａ） 抗ｈＬＨ特異的モノクロナール抗体の製造 ｈＬＨを抗原として、実施例１−ａ）と同様にＢａｌｂ [0094] Example 2 hLH measurement 2-a) anti-hLH specific monoclonal antibody production hLH (human luteinizing hormone) as an antigen, Example 1-a) in the same manner as in Balb／ｃマウスに免疫し、その脾細胞を用いて細胞融合を行い、ｈＬＨ特異的モノクロナール抗体を分泌する融合細胞株並びにｈＣＧ、ｈＬＨ及びｈＦＳＨと交差反応するα−サブユニットを認識するモノクロナール抗体を分泌する融合細胞株を得た。 Immunizing / c mice subjected to cell fusion with the splenocytes, hLH specific monoclonal antibody secreting fusion cell lines and hCG, hLH and hFSH cross recognizes react α- subunit monoclonal antibody to obtain a fusion cell line that secretes.各細胞株を予めプリスタン投与したＢａｌｂ／ｃマウスの腹腔内に投与し、腹水腫瘍を形成させて腹水を得た。 It was administered intraperitoneally Balb / c mice, previously pristane administration of each cell line was obtained ascites by forming ascites tumor.得られた腹水を硫安分画及びアフイゲル−プロテインＡマプスキットにより精製し、凍結乾燥して白色粉末のモノクロナール抗体を得た。 The resulting ascites ammonium sulfate fractionation and Afuigeru - purified by protein A Mapusukitto to obtain monoclonal antibodies of the white powder and freeze-dried.得られた抗ｈＬＨ特異的モノクロナール抗体は、抗体固定部（Ｂ）及び検出部（Ｄ）の作製に用い、α−サブユニットを認識するモノクロナール抗体は標識抗体の作製に用いた。 The resulting anti-hLH-specific monoclonal antibody, used for producing the antibody fixing portion (B) and the detector (D), alpha-subunit recognizing monoclonal antibodies used in the production of labeled antibody.【００９５】２−ｂ） 金コロイド標識抗ｈＬＨ特異的モ [0095] 2-b) colloidal gold-labeled anti-hLH-specific modeノクロナール抗体の製造 ２−ａ）で作製したｈＣＧα−サブユニット認識モノクロナール抗体を１０ｍＭヘペス（ＨＥＰＥＳ）緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解し２００μｇ／ｍｌを調製した。 The hCGα- subunit recognizing monoclonal antibodies prepared in Preparation 2-a) of Nokuronaru antibody was prepared dissolved 200 [mu] g / ml in 10mM Hepes (HEPES) buffer (pH 7.4).コロイド金溶液（金コロイド粒径１０ｎｍ、Ｅ−Ｙラボラトリ−ズ社製）４．０ｍｌにモノクロナール抗体溶液１．０ｍｌを添加し、室温で１０分間攪拌後、０．０５ Colloidal gold solution (colloidal gold particle size 10 nm, E-Y Laboratories - manufactured Inc.) was added monoclonal antibody solution 1.0ml to 4.0 ml, after stirring for 10 minutes at room temperature, 0.05％ＰＥＧ２００００、０．１％ＢＳＡ含有１０ｍＭヘペス緩衝液（ｐＨ７．４）を０．２５ｍｌ加え、１時間攪拌した後、１５０００ｒｐｍ、１０℃、３０分間遠心分離した。 % PEG20000,0.1% BSA containing 10mM Hepes buffer (pH 7.4) was added 0.25 ml, after stirring for 1 hour, 15000rpm, 10 ℃, and centrifuged for 30 min.得られた沈殿に、０．０５％ＰＥＧ２０００ The resulting precipitate, 0.05% PEG2000０、０．１％ＢＳＡ、０．３ＭＤ−マンニトール含有１ 0,0.1% BSA, 0.3MD- mannitol containing 1０ｍＭヘペス緩衝液（ｐＨ７．４）４．０ｍｌを添加して均一に懸濁させた後、更に１０℃、１５０００ｒｐ After 0mM Hepes buffer (pH 7.4) 4.0 ml was uniformly suspended by adding further 10 ℃, 15000rpｍ、３０分間遠心分離した。 m, and centrifuged for 30 min.得られた沈殿に同緩衝液１．０ｍｌを加えて金コロイド標識抗ｈＬＨ抗体を得た。 The same buffer 1.0ml was added to the resulting precipitate to obtain a gold colloid-labeled anti-hLH antibody.得られた抗体は、使用時まで４℃に保存した。 The resulting antibodies were stored in 4 ° C. until use.【００９６】２−ｃ） 試料添加部（Ａ）の製造 クロマトグラフ用濾紙（アドバンテック東洋社製、Ｎ [0096] 2-c) filter paper for the production chromatograph sample addition portion (A) (Advantec Toyo, Nｏ． o.５２６）をカットして１０×２５ｍｍの濾紙片を作製し、実施例１−ｃ）と同様の方法により試料添加部（Ａ）を製造した。 526) was cut to prepare a filter paper piece of 10 × 25 mm, sample addition portion (A) was prepared in the same manner as in Example 1-c).【００９７】２−ｄ） 抗体固定部（Ｂ）の製造 イ）ＣＮＢｒ活性化セルロ−ス濾紙の作製セルロ−ス濾紙（アドバンテック東洋社製、Ｎｏ．５１ [0097] 2-d) producing b antibody fixing portion (B)) CNBr activated cellulose - scan filter paper produced cellulose - scan filter paper (Advantec Toyo Co., No.51４Ａ）を１０×２０ｍｍに切断し、この２ｇを実施例１ The 4A) was cut into 10 × 20 mm, carrying out the 2g Example 1−ｄ）と同様にしてＣＮＢｒ活性化セルロース濾紙を作製した。 To prepare a CNBr activated cellulose filter paper in the same manner as -d).【００９８】ロ）抗ｈＬＨ特異抗体固定セルロース濾紙の作製２−ａ）で作製した抗ｈＬＨ特異的モノクロナール抗体の０、１０、２５、４０、７０および１２０μｇ／ｍｌ [0098] b) 0,10,25,40,70 and 120 [mu] g / ml of anti-hLH-specific monoclonal antibodies prepared in Preparation 2-a) of anti-hLH specific antibody fixed cellulose filter paperの溶液をカップリング緩衝液（０．１ＭＮａＨＣＯ 3含有０．５ＭＮａＣｌ、ｐＨ８．３）にて調製し、各５ｍ Solution coupling buffer (0.1M NaHCO 3 containing 0.5M NaCl, pH 8.3) prepared in each 5mｌに上記イ）で作製したＣＮＢｒ活性化セルロ−ス濾紙片５枚ずつを浸漬し、ゆっくり攪拌しながら室温で約３ l in the i) CNBr activated cellulose produced in - scan one by a piece of filter paper 5 sheets were immersed for about 3 at room temperature with stirring slowly時間、ついで４℃で一夜反応させた。 Time, then was allowed to react overnight at 4 ° C..反応後、実施例１ After the reaction, Example 1−ｄ）と同様に未反応活性基をブロックし、０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）−０．１Ｍトリス緩衝液（ｐＨ -d) and to block the unreacted active groups as well, 0.1 M acetate buffer (pH 4.0)-0.1 M Tris buffer (pH８）で３回洗浄後、室温で乾燥させ、使用時まで４℃にて保存した。 After washing three times with 8), and dried at room temperature and stored at 4 ° C. until use.【００９９】２−ｅ） 検出部（Ｄ）の製造 ニトロセルロース膜（ザルトリウス社製、孔径８μｍ） [0099] 2-e) detecting section (D) of manufacturing a nitrocellulose membrane (Sartorius, pore size 8 [mu] m)を３０×５０ｍｍの大きさに切断し、カマグ・リノマットＩＶを用いて中心部（１５ｍｍの位置）に２−ａ）で作製した抗ｈＬＨ特異的モノクロナール抗体の２００μ It was cut into a size of 30 × 50 mm, 200 [mu] of anti-hLH-specific monoclonal antibodies prepared in the heart using a Kamagu-Rinomatto IV (15 mm position) in 2-a)ｇ／ｍｌ溶液（５０μｇ／ｍｌＢＳＡ含有５０ｍＭトリス緩衝液、ｐＨ８．２）の１０μｌを線型にスプレイし、実施例１−ｅ）と同様にブロッキング、乾燥を行い、検出部（Ｄ）を含むニトロセルロース膜を作製した。 g / ml solution (50 [mu] g / ml BSA containing 50mM Tris buffer, pH 8.2) was sprayed with 10μl linearly in Example 1-e) similarly to the blocking, and then dried, thereby nitrocellulose containing detector (D) to produce a film.【０１００】２−ｆ） 標識物質存在部（Ｃ）の製造 ２−ｅ）で製造した検出部（Ｄ）を含むニトロセルロース膜の検出部に平行に、一端から７ｍｍの位置に、実施例１−ｆ）と同様にカマグ・リノマットＩＶを用いて、 [0100] 2-f) labeling substance present section detecting unit prepared in Preparation 2-e) of (C) (D) parallel to the detection unit of the nitrocellulose membrane containing the position of 7mm from one end, Example 1 -f) and similarly using Kamagu-Rinomatto IV,２−ｂ）で製造した金コロイド標識抗ｈＬＨ特異的モノクロナール抗体を１０％サッカロース溶液で２倍希釈し、その５０μｌを線型にスプレイし、室温で乾燥させ、使用時まで４℃（デシケータ中）で保存した。 2-b) colloidal gold-labeled anti-hLH-specific monoclonal antibodies produced by the two-fold diluted with a 10% sucrose solution, and spray the 50μl linearly, dried at room temperature, 4 ° C. until use (desiccator) in saved.【０１０１】２−ｇ） 装置の製造 ２−ｆ）で製造した検出部（Ｄ）および標識物質存在部（Ｃ）を含むニトロセルロース膜の幅５０ｍｍを３ｍｍ [0102] 3mm width 50mm nitrocellulose membranes containing 2-g) detecting unit prepared in Preparation 2-f) of the device (D) and the labeled substance presence portion (C)ずつに切断して３×３０ｍｍの短冊状とし、また、２− Cut one by a 3 × 30 mm in strip, also 2-ｄ）で各抗体溶液で作製した抗ｈＬＨ特異的モノクロナール抗体固定セルロース濾紙も３ｍｍずつに切断して３ Anti hLH specific monoclonal antibody-immobilized cellulose filter paper produced in the antibody solution in d) be cut one by 3 mm 3×１０ｍｍの短冊を作成した。 × have created a strip of 10mm.図１１(d)に示すように、イ）〜ホ）の突起を付けたプラスチック板のイ）、 As shown in FIG. 11 (d), b) i plastic plate with a projection of ~ e)),ロ）、ハ）およびホ）に両面粘着テープを貼り、ハ）における粘着テープにより検出部（Ｄ）および標識物質存在部（Ｃ）を含むニトロセルロース膜の短冊を図１１ B) c) and attaching the double-sided adhesive tape e), the detection unit by the adhesive tape in c) (D) and the labeled substance presence portion a strip of nitrocellulose membrane containing (C) 11(c)に示すように１ｍｍ間隔で６枚平行に並べて貼り、 Paste arranged six parallel at 1mm intervals as shown in (c),各々について右端に抗ｈＬＨ特異的モノクロナール抗体固定セルロース濾紙の上記短冊を１ｍｍの重なりを持って貼り、さらにその右端に１ｍｍの重なりを持って２− Paste the strip of anti-hLH-specific monoclonal antibody-immobilized cellulose filter paper to the right end with an overlap of 1mm for each further have overlapping 1mm to the right end thereof 2-ｃ）で製造した試料添加部（Ａ）を貼った。 Specimen application portion prepared in c) with (A) was affixed.一方、膜の左端には吸収部（Ｅ）としてクロマトグラフィー用濾紙（アドバンテック東洋社製、Ｎｏ．５８５）の１０×２ On the other hand, the absorption unit to the left end of the film (E) as a chromatography filter paper (Advantec Toyo Co., Nanba585) of 10 × 2５ｍｍの濾紙片をホ）の粘着テープで貼り、ニ）部では、メンブラン（クロマト材（Ｆ））の上に吸収部（Ｅ）が２ｍｍ重なって接触するよう配置した。 Paste the filter paper piece of 5mm in adhesive tape ho), the two) portions, the membrane (absorption unit on top of the chromatographic material (F)) (E) was placed in contact overlap 2 mm.【０１０２】以上のように、メンブラン（クロマト材（Ｆ））および抗体固定部（Ｂ）が支持体に直接触れないような配置で本装置を７枚作製した。 [0102] As described above, the membrane (chromatographic material (F)) and antibody fixing portion (B) was prepared 7 pieces of the device in an arrangement that does not directly touch the support.【０１０３】２−ｈ） 測定 ｈＬＨを０、５０、７５、１００、１５０、２００および３００ｍｉｕ／ｍｌ含有する尿を試料として２−ｇ） [0103] 2-h) 2-g urine containing 0,50,75,100,150,200 and 300miu / ml measured hLH as a sample)で製造した装置各々の試料添加部（Ａ）に２５０μｌ添加した。 And 250μl added to the sample addition part of the apparatus each prepared (A) in.試料中のｈＬＨは、抗体固定部（Ｂ）において捕捉用固定抗体量に応じて一定量が捕捉された後、金コロイド標識抗体と結合してクロマト移動し、検出部（Ｄ）において線型に固定化されている特異抗体に結合し、未反応金コロイド標識抗体および試料溶液はクロマト移動により吸収部（Ｅ）に移動後、検出部（Ｄ）における標識物由来の呈色を観察した。 hLH in the sample, after a certain amount is captured according to capturing fixed amount of antibody in the antibody fixing portion (B), and chromatography moves in conjunction with colloidal gold-labeled antibody, fixed to linear in the detection section (D) bound to specific antibody is of, unreacted colloidal gold-labeled antibody and the sample solution after the movement to the absorption unit (E) by chromatographic movement was observed coloration from labeling substance in the detection section (D).【０１０４】なお、本装置における検出感度は、検出部（Ｄ）に固定化された抗ｈＬＨ特異的モノクロナール抗体量と、標識物質存在部（Ｃ）の金コロイド標識抗体量により５０ｍｉｕ／ｍｌと設定し、抗体固定部（Ｂ）の捕捉用抗体量、寸法等により半定量幅を設定した。 [0104] The detection sensitivity in the present apparatus, a detection unit (D) to the immobilized anti-hLH-specific monoclonal antibody amount, and 50 mIU / ml by colloidal gold-labeled antibody of the labeled substance presence portion (C) set, capture antibody of the antibody fixing portion (B), was set semiquantitative width by dimension, or the like.【０１０５】各試料を添加した装置の検出部（Ｄ）の呈色は、表２(a)に示す通りであった。 [0105] coloration detector device with the addition of each sample (D) was as shown in Table 2 (a).表２(b)は、赤色の線型が認められた場合を「＋」、認められなかった場合を「−」と示した。 Table. 2 (b), a case where red linear was observed "+", the case where the observed - indicated by "".【０１０６】 【表２】 [0106] [Table 2]【０１０７】実施例３ エストロゲンの測定３−ａ） エストリオール−１６−グルクロナイド−ＢＳ [0107] measurement 3-a of Example 3 estrogen) estriol-16-glucuronide -BSＡの製造 エストリオール−１６−グルクロナイド４０ｍｇをジメチルホルムアミド１．０ｍｌに溶解し、これに４℃以下でトリ−ｎ−ブチルアミン２０．６μｌを添加したのち、イソブチルクロロカーボネート１１．２μｌを加え３０分間攪拌した。Manufacturing estriol-16-glucuronide 40mg of A was dissolved in dimethylformamide 1.0 ml, stirring it to 4 ° C. After addition of tri -n- butylamine 20.6μl below 30 minutes was added isobutyl chlorocarbonate 11.2μl did.これに予めＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）１１７ｍｇを２．８ｍｌの水に溶解したものに１ 1 pre-BSA (bovine serum albumin) 117 mg thereto is dissolved in a water 2.8mlＮＮａＯＨ溶液１５０μｌを加えた後、ジメチルホルムアミド２．０ｍｌを加え、８℃に保たれた液を混合した。 After adding NNaOH solution 150 [mu] l, dimethylformamide 2.0ml was added and mixed liquid was kept at 8 ° C..次いでこれを８℃で攪拌し、１時間後に１ＮＮａＯ Then stirred it at 8 ℃, 1NNaO after 1 hourＨ溶液１６．６μｌを加え、さらに３．５時間攪拌したのち、セファデックスＧ−２５で未反応のエストリオール−１６−グルクロナイドおよびトリ−ｎ−ブチルアミン等の低分子試薬を除去した。 H solution 16.6μl was added, after stirring for further 3.5 hours to remove low molecular reagent, such as estriol-16-glucuronide and tri -n- butylamine unreacted Sephadex G-25.さらにこれを透析（精製水に対し）した後、凍結乾燥すると、エストリオール− Furthermore it was dialyzed it (to purified water), and lyophilized, estriol -１６−グルクロナイド−ＢＳＡが得られた。 16-glucuronide -BSA was obtained.この抗原の凍乾末についてのコーベル反応により、ＢＳＡ１モル当りエストリオール−１６−グルクロナイド２７〜３０モルの結合が確認された。 The corbel response for Koinui end of this antigen, binding of BSA1 mole estriol-16-glucuronide 27 to 30 mol was confirmed.【０１０８】３−ｂ） 抗エストリオール−１６−グルク [0108] 3-b) anti-estriol-16-Gurukuロナイド抗体の製造 上記３−ａ）で製造したエストリオール−１６−グルクロナイド−ＢＳＡ２ｍｇを１ｍｌの生理食塩水に溶解し、同量のコンプリートフロインドアジュバントで乳化し、成熟家兎の足蹠および皮下に注射した。 Estriol-16-glucuronide -BSA2mg prepared in the Ronaido antibody producing the 3-a) was dissolved in physiological saline 1 ml, it was emulsified with an equal volume of complete Freund's adjuvant, injected into the footpad and subcutaneously mature rabbit did.この注射を１ヶ月間隔で行い、抗体価の上昇を確認後全採血を行い抗血清を得た。 Do this injection at 1 month intervals, to obtain the anti-serum confirms after exsanguination an increase in antibody titer.この抗血清を５６℃３０分間非働化後Ｂ The antiserum 56 ° C. 30 minutes inactivated after BＳＡで吸収し、次いで硫酸アンモニウムによる塩析、Ｄ Absorbed by SA, and then salting-out with ammonium sulfate, DＥＡＥ−セルロースクロマトグラフィー、セファデックスＧ２００によるゲル濾過により精製したのち凍結乾燥し、白色粉末状の抗Ｅ 3 １６Ｇ抗体を得た。 EAE- chromatography, and lyophilized after purification by gel filtration on Sephadex G200, to obtain a white powdery anti E 3 16G antibody.【０１０９】３−ｃ） エストリオール−１６−グルクロ [0109] 3-c) estriol-16-Gurukuroナイド結合ポリアクリル酸（Ｅ 3 １６Ｇ−ＰＡＡ）の作Work of the ruler's private property bond polyacrylic acid (E 3 16G-PAA)製 イ）エストリオール−１６−グルクロナイド−ヘキサメチレンジアミン誘導体エストリオール−１６−グルクロナイド９３ｍｇと、Ｎ−ハイドロキシコハク酸イミド２Ltd. b) estriol-16-glucuronide - hexamethylene diamine derivative estriol-16-glucuronide 93 mg, N-hydroxy succinimide 2５ｍｇをＤＭＦ１．５ｍｌに溶かし、氷冷下攪拌しつつＤＣＣ４１ｍｇを加える。 Dissolved 5mg to DMF1.5ml, adding DCC41mg with stirring under ice-cooling.３０分後、モノベンジルオキシカルボニルヘキサメチレンジアミン塩酸塩５５ｍｇ、 After 30 minutes, mono-benzyloxycarbonyl hexamethylenediamine hydrochloride 55 mg,トリエチルアミン０．０３ｍｌをＤＭＦ１ｍｌに溶かした溶液を加え、氷冷下で２時間、室温で１２時間攪拌を続ける。 A solution of triethylamine 0.03ml to DMF1ml addition, 2 hours under ice cooling, and stirring is continued for 12 hours at room temperature.全体を減圧乾固し、残渣をプレパラティブ薄層クロマトグラフィーに付して目的の標記化合物８２ｍｇ The whole was evaporated to dryness under reduced pressure, the title compound of interest residue was subjected to preparative thin layer chromatography 82mg（対理論収率５５％）を得た。 Was obtained (vs. theoretical yield 55%).本品はシリカゲル薄層クロマトグラフィーでＲｆ＝０．４２（クロロホルム−メタノール５：１）を示した。 The product Rf = 0.42 on silica gel thin layer chromatography (chloroform - methanol 5: 1) showed.【０１１０】ロ）上記イ）で得たエストリオール−１６ [0110] b) estriol -16 obtained in the above i)−グルクロナイド−ヘキサメチレンジアミン誘導体５０ - glucuronide - hexamethylene diamine derivative 50ｍｇをメタノール３ｍｌに溶かし、パラジウム黒１０ｍ Dissolved mg in methanol 3ml, palladium black 10mｇを加え、常温常圧で水素気流中で攪拌する。 g is added and stirred in a hydrogen stream at normal temperature and pressure.２時間で反応は終了し、触媒を濾去し、濾液を減圧濃縮し、残渣にエーテルを加え、カルボベンジルオキシ基が脱離した目的物３５ｍｇを粉末として得た。 Reaction for 2 hours was completed, the catalyst was filtered off, the filtrate was concentrated under reduced pressure, the residue in ether was added and the desired product was obtained 35mg of carbobenzyloxy group was eliminated as a powder.この生成物１０ｍｇ The product 10mgをポリアクリル酸１００ｍｇとともにＤＭＦ２ｍｌに溶かし、ＤＣＣ４ｍｇを加え、室温に５０時間放置する。 Was dissolved in DMF2ml with polyacrylic acid 100mg, added DCC4mg, left for 50 hours at room temperature.反応液を透析し、内液を濾過後凍結乾燥すると、エストリオール−１６−グルクロナイド結合ポリアクリル酸（Ｅ 3 １６Ｇ−ＰＡＡ）９５ｍｇを白色粉末として得た。 The reaction solution was dialyzed and the internal solution freeze dried after filtration to give (3 16G-PAA E) 95mg estriol-16-glucuronide bound polyacrylic acid as a white powder.【０１１１】３−ｄ） 着色ラテックス標識Ｅ 3 １６Ｇ− [0111] 3-d) colored latex-labeled E 3 16G-ＰＡＡの製造 赤色アミノ化ポリスチレンラテックス（固形分１０％、PAA prepared red aminated polystyrene latex (10% solids,日本合成ゴム社製、粒径０．３７μｍ）０．５ｍｌにＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）・精製水（１：１）で調製した１０％トリエチルアミン溶液１２ Manufactured by Japan Synthetic Rubber Co., Ltd., N the particle size 0.37 .mu.m) 0.5 ml, N-dimethylformamide (DMF) · Purified water (1: 1) 10% triethylamine to prepare a solution 12ｍｌを加えて懸濁させ、１５分攪拌後、遠心分離した。 ml was added and suspended, after stirring for 15 minutes, and centrifuged.沈殿をＤＭＦ・水（１：１）１０ｍｌで２回、精製水１ The precipitate DMF · Water (1: 1) twice with 10 ml, purified water 1０ｍｌで１回遠心洗浄後、精製水０．５ｍｌに懸濁させ、３−ａ）で製造したＥ 3 １６Ｇ−ＰＡＡの溶液（Ｅ 3 After one centrifugation washed with 0 ml, suspended in purified water 0.5ml, 3-a) E was prepared in 3 16G-PAA solution (E 3１６Ｇ−ＰＡＡ２ｍｇを１ｍｌの精製水に溶解）を加えて混合し、次いで１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩７．５ｍｇを加え、 16G-PAA2mg added and mixed lysis) of purified water 1ml and then 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride 7.5mg addition,攪拌下一夜反応を行った。 The mixture was stirred overnight under reaction.反応終了後、遠心分離して得た沈殿をグリシン緩衝液１０ｍｌで３回遠心洗浄を繰返した後、３０％サッカロース、０．１％ＧＳＡ（ヤギ血清アルブミン）含有グリシン緩衝液１０ｍｌに懸濁し、 After completion of the reaction, the precipitate obtained by centrifugation was repeated 3 times centrifugally washed with glycine buffer 10 ml, was suspended in 30% sucrose, 0.1% GSA (goat serum albumin) -containing glycine buffer 10 ml,Ｅ 3 １６Ｇ−ＰＡＡ結合着色ラテックスを製造した。 It was prepared E 3 16G-PAA binding colored latex.【０１１２】３−ｅ） 試料添加部（Ａ）の製造 ガラス繊維濾紙（アドバンテック東洋社製、ＧＡ−１０ [0112] 3-e) producing a glass fiber filter paper specimen application portion (A) (Advantec Toyo Co., GA-10０、２．１φｃｍ）を精製水に浸漬して洗浄、水切り後、これを２％脱脂粉乳２．５％ＢＳＡ含有０．１Ｍトリス緩衝液（ｐＨ８．２）溶液に浸漬し、４℃にて一昼夜放置後０．１Ｍトリス緩衝液で洗浄し、液切りして室温で乾燥させた。 0,2.1Faicm) immersed in a washing in purified water, after draining, which was immersed in 2% skimmed milk powder 2.5% BSA containing 0.1M Tris buffer (pH 8.2) solution, at 4 ° C. washed with overnight after leaving 0.1M tris buffer, and dried at room temperature draining.【０１１３】３−ｆ） 抗体固定部（Ｂ）の製造 イ）ＣＮＢｒ活性化セルロース濾紙の作製セルロース濾紙（アドバンテック東洋社製、Ｎｏ．５２ [0113] 3-f) antibody fixing portion (B) of production i) CNBr activated cellulose filter paper Preparation Cellulose filter paper (Advantec Toyo Co., No.52６、厚さ０．７０ｍｍ）を１０×２０ｍｍの濾紙片に切断し、この２ｇを実施例１−ｄ）と同様にしてＣＮＢｒ 6, a thickness of 0.70 mm) was cut into a piece of filter paper of 10 × 20 mm, and the 2g in the same manner as in Example 1-d) to CNBr活性化セルロース濾紙を作製した。 The activated cellulose filter paper was produced.【０１１４】ロ）抗Ｅ 3 １６Ｇ抗体固定セルロース濾紙の作製３−ｂ）で製造した抗Ｅ 3 １６Ｇ抗体の０、０．２５、 [0114] b) Anti-E 3 16G antibody fixed Production of Cellulose filter paper 3-b) of the anti-E 3 16G antibody produced in 0, 0.25,０．５および１．０ｍｇ／ｍｌの溶液をカップリング緩衝液（０．１ＭＮａＨＣＯ 3含有０．５ＭＮａＣｌ、ｐ The solution coupling buffer 0.5 and 1.0mg / ml (0.1MNaHCO 3 containing 0.5M NaCl, pＨ８．３）にて調製し、各５ｍｌにイ）で作製したＣＮ Prepared in H8.3), prepared in b) to each 5 ml CNＢｒ活性化セルロース濾紙片５枚ずつを浸漬し、室温で２時間ゆっくり攪拌して反応させた後、実施例１−ｄ） Immersing the Br activated cellulose filter paper pieces by five, after the reaction stirred gently at room temperature for 2 hours, Example 1-d)と同様に未反応活性基をブロックし、０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）−０．１Ｍトリス緩衝液（ｐＨ８）で３回洗浄後、室温で乾燥させ使用時まで４℃で保存した。 Blocking unreacted active groups in the same manner as, washed three times with 0.1M acetate buffer (pH 4.0)-0.1 M Tris buffer (pH 8), and stored at 4 ° C. until use dried at room temperature .【０１１５】３−ｇ） 検出部（Ｄ）の製造 ニトロセルロース膜（ザルトリウス社製、孔径５μｍ） [0115] 3-g) detecting section (D) of manufacturing a nitrocellulose membrane (Sartorius, pore size 5 [mu] m)を３０×５０ｍｍの大きさに切断し、カマグ・リノマットＩＶを用いて端から１０ｍｍの部分に抗Ｅ 3 １６Ｇモノクロナール抗体（帝国臓器製薬社製）の０．２５ｍｇ It was cut into a size of 30 × 50 mm, 0.25 mg of Kamagu-to 10mm portion from the end with Rinomatto IV anti E 3 16G monoclonal antibody (Teikokuzokiseiyaku Co.)／ｍｌ（ＢＳＡ５０μｌ／ｍｌ含有５０ｍＭトリス緩衝液、ｐＨ８．２）の１０μｌを線型にスプレイ後、実施例１−ｃ）と同様に処理して検出部（Ｄ）を含むニトロセルロース膜を作製した。 / Ml (BSA50μl / ml containing 50mM Tris buffer, pH 8.2) after spraying linearly with 10μl of, to prepare a nitrocellulose membrane containing Example 1-c) and similarly treated with detector (D).【０１１６】３−ｈ） 標識物質存在部（Ｃ）の製造 ポリエステル不織布（１０×４ｍｍ、厚さ０．５ｍｍ） [0116] 3-h) producing a polyester nonwoven labeling substance present section (C) (10 × 4mm, thickness 0.5 mm)を０．１％可溶化カゼイン溶液に浸漬し、３７℃１時間放置後、液切りし、３−ｄ）で製造した着色ラテックス標識Ｅ 3 １６Ｇ−ＰＡＡ懸濁液を２０μｌ含浸させ、室温にて乾燥し、使用時までデシケータ中に保存した。 Was immersed in a 0.1% solubilizing casein solution, after standing 37 ° C. 1 h, then draining, 3-d) to 20μl impregnated with colored latex label E 3 16G-PAA suspension produced at, at room temperature dried and stored in a desiccator until use.【０１１７】３−ｉ） 装置の製造 ３−ｇ）で作製した検出部（Ｄ）を含むニトロセルロース膜の幅５０ｍｍを４ｍｍずつに切断して４×３０ｍｍ [0117] 3-i) detection unit was fabricated by the manufacturing 3-g) of the device width 50mm nitrocellulose membranes containing (D) was cut into each 4 mm 4 × 30 mmの短冊とし、３−ｆ）で各抗体溶液で作製した抗Ｅ 3 １ A strip of, 3-f) with an anti-E 3 1 produced in each antibody solution６Ｇ抗体固定セルロース濾紙も４ｍｍずつに切断して４ 6G antibody fixed cellulose filter paper be cut one by 4 mm 4×１０ｍｍの短冊状とした。 × was 10mm of the strip.図１２(f)に示すように、 As shown in FIG. 12 (f),ガラス板（支持体（Ｇ））上に両面テープを貼り、その中央部に３−ｅ）で製造した試料添加部（Ａ）を貼り、 A glass plate (support (G)) to paste the double-sided tape on, stick the specimen application portion prepared in 3-e) in the central portion (A),次に上記各溶液で作製した抗Ｅ 3 １６Ｇ抗体固定セルロース濾紙の短冊を（Ａ）のまわりに等間隔で１ｍｍの重なりを持って貼り、（水平左側から抗体０、０．２５、 Then attached with an overlap of 1mm at equal intervals around the strip of anti-E 3 16G antibody fixed cellulose filter paper prepared in the above solution (A), (antibody horizontal left 0, 0.25,０．５および１．０ｍｇ／ｍｌの順）、その先に３− Order 0.5 and 1.0 mg / ml), to the previously 3-ｈ）で製造した標識物質存在部（Ｃ）を２ｍｍの重なりをもって貼った。 Labeled substance presence portion to produce (C) stuck with an overlap of 2mm in h).最後にクロマトグラフィー用セルロース濾紙（アドバンテック東洋社製、Ｎｏ．５８５）の４ Finally chromatography cellulose filter paper (manufactured by Advantec Toyo Kaisha, Ltd., No.585) 4 of×１０ｍｍの濾紙片を吸収部（Ｅ）として２ｍｍの重なりをもって貼り、各々の連結を確実なものとした。 × paste a piece of filter paper of 10mm with a overlap of 2mm as the absorption section (E), it made sure each connection.同様にして本装置を５枚作製した。 The present device was made five similarly.【０１１８】３−ｊ） 測定 エストロゲンを０、１、２、４および８μｇ／ｍｌ含有する尿を試料として３−ｉ）で製造した装置の各々の試料添加部（Ａ）に３００μｌを添加した。 [0118] 3-j) was added to 300μl to each specimen application portion of urine containing 0, 1, 2, 4 and 8 [mu] g / ml measuring estrogen device manufactured by 3-i) as a sample (A).試料中のエストロゲンは、抗体固定部（Ｂ）において、捕捉用固定抗体量に応じて一定量が捕捉された後、捕捉されなかったエストロゲンは標識物質存在部（Ｃ）の着色ラテックス標識Ｅ 3 １６Ｇ−ＰＡＡと共にクロマト移動により検出部（Ｄ）へ移動し、抗Ｅ 3 １６Ｇ抗体と競合的に結合し、未反応標識物質がクロマト移動により吸収部（Ｅ） Estrogen in the sample, the antibody fixing portion (B), colored latex label E 3 16G after a certain amount depending on the capture immobilized antibody amount is captured, estrogen uncaught labeling substance present section (C) and movement detection unit to (D) by chromatography move with-PAA, competitively bind to the anti-E 3 16G antibody absorber unreacted labeled substance by chromatographic movement (E)に移動後、検出部（Ｄ）における標識物由来の呈色を観察した。 After moving, the observed coloration from labeling substance in the detection section (D).【０１１９】なお、本装置における検出感度は、検出部（Ｄ）に固定化された抗Ｅ 3 １６Ｇモノクロナール抗体量と、標識物質存在部（Ｃ）の着色ラテックス標識Ｅ 3 [0119] The detection sensitivity in the present apparatus, a detection unit (D) to the immobilized anti-E 3 16G monoclonal antibody amount, colored latex label E 3 of the labeled substance presence portion (C)１６Ｇ−ＰＡＡ量により両者の反応を１μｇ／ｍｌのエストロゲンが阻止できるように設定し、抗体固定部（Ｂ）の捕捉用抗体量、寸法等により半定量幅を設定した。 Set the reaction therebetween so as to be prevented 1 [mu] g / ml of estrogen by 16G-PAA amount, capture antibody of the antibody fixing portion (B), was set semiquantitative width by dimension, or the like.各試料を添加した装置の検出部（Ｄ）の呈色は、 Coloration of the detection portion of the apparatus with the addition of each sample (D) is表３(a)に示す通りであった。 Was as shown in Table 3 (a).表３(b)は、赤色の線型が認められた場合を「−」、認められなかった場合を「＋」と表示した。 Table. 3 (b), a case where the red of linear was observed "-", a case that was not observed labeled "+".【０１２０】 【表３】 [0120] [Table 3]【０１２１】 【発明の効果】本発明により、試料の希釈を必要とせず、しかも、試料の「希釈効果」の調整に関与する要因が少ないため、希釈効果の調整が容易であり、感度良く、即ち半定量値幅を狭く設定することができる簡易な免疫化学的半定量方法および装置が提供された。 By [0121] The present invention does not require dilution of the sample, moreover, since fewer factors involved in regulating the "dilution effect" of the sample, it is easy to adjust the dilution effect, high sensitivity, that semiquantitative width narrowly simple immunochemical semi-quantitative method and apparatus capable of setting is provided.

【図面の簡単な説明】 【図１】図１は、分析対象物が完全抗原である場合の本発明の半定量方法の原理を示す図である（試料添加時）。 BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS FIG. 1 is a diagram showing the principle of a semi-quantitative method of the present invention when the analyte is a complete antigen (when the sample is added).【図２】図２は、分析対象物が完全抗原である場合の本発明の半定量方法の原理を示す図である（アッセイ進行時）。 Figure 2 is a diagram showing the principle of a semi-quantitative method of the present invention when the analyte is a complete antigen (assay during the course).【図３】図３は、分析対象物が完全抗原である場合の本発明の半定量方法の原理を示す図である（アッセイ完了時）。 Figure 3 is a diagram showing the principle of a semi-quantitative method of the present invention when the analyte is a complete antigen (at the assay completion).【図４】図４は、分析対象物がハプテンである場合の本発明の半定量方法の原理を示す図である（試料添加時）。 Figure 4 is a diagram showing the principle of a semi-quantitative method of the present invention when the analyte is a hapten (when the sample is added).【図５】図５は、分析対象物がハプテンである場合の本発明の半定量方法の原理を示す図である（アッセイ進行時）。 Figure 5 is a diagram showing the principle of a semi-quantitative method of the present invention when the analyte is a hapten (assay during the course).【図６】図６は、分析対象物がハプテンである場合の本発明の半定量方法の原理を示す図である（アッセイ完了時）。 Figure 6 is a diagram showing the principle of a semi-quantitative method of the present invention when the analyte is a hapten (when the assay completion).【図７】図７は、分析対象物がハプテンである場合の本発明の半定量方法の原理を示す図である（試料添加時）。 Figure 7 is a diagram showing the principle of a semi-quantitative method of the present invention when the analyte is a hapten (when the sample is added).【図８】図８は、分析対象物がハプテンである場合の本発明の半定量方法の原理を示す図である（アッセイ進行時）。 Figure 8 is a diagram showing the principle of a semi-quantitative method of the present invention when the analyte is a hapten (assay during the course).【図９】図９は、分析対象物がハプテンである場合の本発明の半定量方法の原理を示す図である（アッセイ完了時）。 Figure 9 is a diagram showing the principle of a semi-quantitative method of the present invention when the analyte is a hapten (when the assay completion).【図１０】図１０は、本発明の半定量装置の基本的構成を示す図である。 Figure 10 is a diagram showing a basic structure of a semi-quantitative system of the present invention.【図１１】図１１は、本発明の半定量装置の基本的構成を示す図である。 Figure 11 is a diagram showing a basic structure of a semi-quantitative system of the present invention.【図１２】図１２は、本発明の半定量装置の構成を示す図である。 Figure 12 is a diagram showing the configuration of a semi-quantitative system of the present invention.

Claims (1)

Translated from Japanese

(57)【特許請求の範囲】 【請求項１】 クロマト法による免疫化学的簡易アッセイにおいて； 複数の免疫アッセイ用ユニットからなる免疫アッセイ用装置を用い； 装置を構成する各ユニット上で行われる免疫化学的定性分析の前に、 固定化されて存在する分析対象物に対する抗体（以下、 (57) Claims 1. A immunochemical simple assay by chromatography; using a immunoassay for apparatus comprising a plurality of immunoassay for unit; immune performed on each unit constituting the apparatus before chemical qualitative analysis, antibody to analyte present immobilized (hereinafter,捕捉用抗体と略す）により、各ユニットに固定化された捕捉用抗体の量に対応する量の試料中の分析対象物を捕捉して各ユニット上で行われる免疫化学的定性分析に付される分析対象物濃度を減少させ、ここで、捕捉用抗体は、ユニット毎に異なる量で、かつ The abbreviated as capture antibody), it is subjected to the analyte to catch and immunochemical qualitative analysis performed on each unit of the amount in the sample corresponding to the amount of capture antibody immobilized on each unit analyte concentration reduces,wherein the capture antibody is a different amount for each unit, and適宜な幅で順次段階的に変化させ た量で固定化されており； 装置を構成するユニットのうちの少なくとも１つにおいては、試料中の分析対象物が捕捉用抗体によって捕捉された結果、その濃度が検出感度未満になり、引き続く免疫化学的定性分析において分析対象物が検出されず、 かつ、装置を構成するユニットのうちの少なくとも１つ Is immobilized in an amount which successively stepwise changed at an appropriate width; in at least one of the units constituting the device, as a result of the analyte in the sample is captured by the capture antibody, the concentration is below the detection sensitivity, the analyte in immunochemical qualitative analysis subsequent is not detected and at least one of the units constituting the deviceにおいては、試料中の分析対象物 の濃度が検出感度以上ある場合には、引き続く免疫化学的定性分析において分析対象物が検出され； 分析対象物が検出される限界または検出されなくなる限界のユニットにおける捕捉用抗体の量に対応する分析対象物の半定量値が決定されることからなる免疫化学的簡易半定量方法。In the case where the concentration of the analyte in the sample is greater than the detection sensitivity, subsequent immunochemical In qualitative analysis analyte is detected; at the limit or detected not become the limit of units analyte is detected immunochemical simple semiquantitative method comprising the semi-quantitative value of the analyte corresponding to the amount of capture antibody is determined.【請求項２】 分析対象物が完全抗原およびハプテンからなる群から選ばれる請求項１に記載の方法。 2. A method according to claim 1, analyte is selected from the group consisting of fully antigens and haptens.【請求項３】 分析対象物がｈＣＧ、ｈＬＨまたはエストロゲンである請求項２に記載の方法。 Wherein the analyte is hCG, method of claim 2 wherein the hLH or estrogens.【請求項４】 請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法を実施するための、複数の免疫アッセイ用ユニットからなる免疫アッセイ用装置であって； 各ユニットは試料中の分析対象物の一定量を捕捉する抗体が所定量で固定化されて存在する抗体固定部（Ｂ）、 分析対象物の存在の有無を検出するための指標となる標識物質がクロマト移動しうる状態で存在する標識物質存在部（Ｃ）および標識物質を検出するための検出用物質が固定化されて存在する検出部（Ｄ）からなり； 装置は、上記複数のユニットと分析対象物を含む試料を添加するための各ユニットにおいて共通の試料添加部（Ａ）および各ユニットで共通であっても、各ユニットで独立していてもよい、添加された試料とともに分析対象物の有無の検出に関与しない標識物質を吸 4. A for carrying out the method according to any one of claims 1 to 3, a immuno assay device comprising a plurality of immunoassay for unit; analyte each unit in the sample antibody that captures a certain amount is present in a state in which an antibody fixing portion present is fixed in a predetermined amount (B), the labeling substance as an index for detecting the presence or absence of analyte can chromatographic movement of labeled substance presence portion (C) and a detection unit for detection substance for detecting the labeled substance is present being fixed consist (D); apparatus, adding a sample containing the analyte with said plurality of units labeling substance which is not involved in detection of the presence or absence of a common sample application part (a) and be common in each unit may be independent of each unit, the analyte with an added sample in each unit for sucked the収除去する吸収部（Ｅ） からなり； 各ユニットの抗体固定部（Ｂ）に固定される捕捉用抗体の量は、ユニット毎に異なり、適宜な幅で順次段階的に変化させた量であることを特徴とするイムノクロマト法による免疫化学的簡易半定量装置。 Absorption unit which removes yield consists (E); the amount of capture antibody immobilized on the antibody fixing portion of each unit (B) is different for each unit is the amount that was sequentially stepwise changed at an appropriate width immunochemical simple semi-quantitative device according immunochromatographic method characterized by.【請求項５】 分析対象物が完全抗原であり、標識物質が抗体固定部（Ｂ）に存在する固定化された分析対象物捕捉用抗体（以下、捕捉用抗体Ｉと略す）とは異なる分析対象物上の抗原決定基を認識する標識された抗体（以下、標識抗体ＩＩと略す）であり、検出用物質が少なくとも標識抗体ＩＩとは異なる分析対象物上の抗原決定基を認識する抗体（以下、検出用抗体ＩＩＩと略す）である請求項４に記載の装置。 Wherein a analyte complete antigen, antibody fixing portion labeled substance (B) immobilized analyte capture antibody present in (hereinafter, referred to as capture antibody I) is different from the analysis recognize antigenic determinants on the object labeled antibody (hereinafter, referred to as the labeled antibody II) is recognize antigenic determinants on the detection substance is different analyte is at least labeled antibody II antibody ( hereinafter, apparatus according to claim 4, which is referred to as detector antibody III).【請求項６】 分析対象物がハプテンであり、抗体固定部（Ｂ）に存在する固定化された分析対象物捕捉用抗体がハプテン抗体（以下、捕捉用抗体ＩＶと略す）であり、検出用物質が分析対象物と結合し得るハプテン抗体（以下、検出用抗体Ｖと略す）であり、標識物質が分析対象物と競合的に検出用抗体Ｖと結合しうる標識された物質である請求項４に記載の装置。 6. a analyte hapten, antibody fixing portion (B) immobilized analyte capture antibody-hapten antibodies present in (hereinafter, referred to as capture antibody IV) is, for the detection hapten antibody substance capable of binding the analyte (hereinafter abbreviated as detection antibody V) are, claim a labeled substance labeling substance capable of binding to competitively detection antibody V and the analyte the apparatus according to 4.【請求項７】 分析対象物がハプテンであり、抗体固定部（Ｂ）に存在する固定化された分析対象物捕捉用抗体がハプテン抗体（以下、捕捉用抗体ＶＩと略す）であり、標識物質が分析対象物と結合し得る標識されたハプテン抗体（以下、標識抗体ＶＩＩと略す）であり、検出用物質が標識抗体ＶＩＩに対して分析対象物であるハプテンと競合的に結合しうる物質である請求項４に記載の装置。 7. A analyte hapten, antibody fixing portion (B) immobilized analyte capture antibody-hapten antibodies present in (hereinafter, referred to as capture antibody VI) are labeled substance There labeled hapten antibody capable of binding the analyte (hereinafter abbreviated as a labeled antibody VII) are, in substance detection substance can competitively bind to a hapten is the analyte relative to the labeled antibody VII apparatus according to one claim 4.【請求項８】 分析対象物がｈＣＧまたはｈＬＨである請求項５に記載の装置。 8. Apparatus according analyte to claim 5 which is hCG or hLH.【請求項９】 分析対象物がエストロゲンである請求項６に記載の装置。 9. The apparatus of claim 6 analyte is an estrogen.【請求項１０】 各ユニットの吸収部（Ｅ）が共通である請求項４に記載の装置。 10. A device according to claim 4 absorption of each unit (E) is common.